采用RT-PCR和RACE技術(shù),從中國水仙‘金盞銀臺’中獲得1個MADS-box基因NtPI2。NtPI2基因全長810bp,含有1個627bp開放閱讀框,編碼208個氨基酸。系統(tǒng)進化樹顯示,NtPI2屬于B類MADS-box基因家族的PI/GLO類基因。熒光定量PCR分析表明,NtPI2基因在中國水仙‘金盞銀臺’各營養(yǎng)器官中都有表達;在單瓣和重瓣水仙花朵的各個部位均有表達,但表達模式存在差異。比較NtPI2在單瓣和重瓣中國水仙中的表達模式,發(fā)現(xiàn)重瓣水仙‘玉玲瓏’的瓣化雄蕊和副冠的NtPI2基因表達量較單瓣水仙‘金盞銀臺’顯著增高,推測NtPI2基因在瓣化雄蕊中表達量顯著增高可能是重瓣中國水仙發(fā)生的直接原因。成功構(gòu)建了NtPI2基因的pCAMBIA1302-NtPI2超表達載體,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進行煙草的遺傳轉(zhuǎn)化,分子鑒定結(jié)果表明共獲得了8株轉(zhuǎn)NtPI2基因植株。本研究為深入探索NtPI2基因的功能及其與中國水仙重瓣花形成的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。

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【部分圖文】：

圖１ＮｔＰＩ２基因的克隆

定量ＰＣＲ分析。將基因在單瓣水仙花蕾中的表達量設(shè)定為１，結(jié)果表明（圖４），ＮｔＰＩ２基因在‘金盞銀臺’的營養(yǎng)器官中有少量表達，在‘金盞銀臺’和‘玉玲瓏’各個花器官中均有不同程度的表達。在單瓣水仙‘金盞銀臺’各器官中ＮｔＰＩ２表達量由高到低分別為：雌蕊＞副冠＞雄蕊＞花瓣，在‘玉玲瓏....

圖２ＮｔＰＩ２編碼的氨基酸序列與其他物種ＰＩ／ＧＬＯ類ＭＡＤＳ－ｂｏｘ的比較

ＢＡＣ６６９６２．百子蓮；ＡＣＤ８５０９２．白拉索蘭；ＡＢＢ２２７７７．番紅花；ＡＤＷ７６８６０．蕙蘭；ＡＢＷ９６３９．石斛蘭圖２ＮｔＰＩ２編碼的氨基酸序列與其他物種ＰＩ／ＧＬＯ類ＭＡＤＳ－ｂｏｘ的比較ＢＡＣ６６９６２．Ａｇａｐａｎｔｈｕｓｐｒａｅｃｏｘ；ＡＣＤ８５０９２．Ｂｒａ....

圖３ＮｔＰＩ２及其他Ｂ類ＭＡＤＳ－ｂｏｘ轉(zhuǎn)錄因子的進化樹分析

２ＮｔＰＩ２編碼的氨基酸序列與其他物種ＰＩ／ＧＬＯ類ＭＡＤＳ－ｂｏｘ的比較ＢＡＣ６６９６２．Ａｇａｐａｎｔｈｕｓｐｒａｅｃｏｘ；ＡＣＤ８５０９２．Ｂｒａｓｓａｖｏｌａｎｏｄｏｓａ；ＡＢＢ２２７７７．Ｃｒｏｃｕｓｓａｔｉｖｕｓ；ＡＤＷ７６８６０．Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍｆａｂｅｒｉ；ＡＢ....

圖５ＮｔＰＩ２表達載體的ＰＣＲ鑒定

．Ｏｖａｒｙ）；ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｏｒｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔＰ＜０．０５．Ｆｉｇ．４ＮｔＰＩ２ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｇａｎｓｏｆｆｌｏｗｅｒｆｒｏｍ‘Ｊｉｎｚｈａｎｙｉｎｔａｉ’（....

本文編號：4045103