菊花(Chrysanthemum×morifolium Ramat.)是菊科菊屬,多年生草本植物,是世界著名的觀賞植物之一。菊花分為夏菊、秋菊和冬菊(寒菊),但以秋菊為主,這種固定的花期與人們四季賞菊的需求不再相符,所以控制菊花花期的研究備受關(guān)注。傳統(tǒng)技術(shù)上誘導(dǎo)菊花提前開花主要是通過調(diào)控光周期和改變環(huán)境溫度來實現(xiàn)的,成本較高。因此尋找更加便捷有效的調(diào)控花期分子生物學(xué)方法,更具有廣闊的前景和推廣價值。目前通過DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑處理調(diào)控植物花期的研究已取得了一些進展。為了促進菊花提前開花的方法更適合生產(chǎn)應(yīng)用,本研究利用5-氮雜胞苷(5-Azacytidine)和姜黃素兩種甲基化酶抑制劑來設(shè)置不同的處理方式來處理55個菊花品種(包括組培苗和菊花插穗),然后以處理材料的再生植株為研究對象,通過生長發(fā)育指標測定、液相色譜、MSAP、轉(zhuǎn)錄組測序和熒光定量PCR等方法,研究了5-zaz C和姜黃素對菊花DNA甲基化水平及花期基因表達的影響。主要結(jié)果如下:(1)使用姜黃素和5-azaC處理菊花,產(chǎn)生了豐富的表型變異材料。利用姜黃素和5-azaC處理組培品種30 d后,分別有7個菊花品種的株高、10...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 緒論
    1.1 植物成花研究進展
    1.2 光周期途徑調(diào)控開花研究
    1.3 自主途徑調(diào)控開花研究
    1.4 表觀遺傳學(xué)
    1.5 DNA甲基化
    1.6 開花時間調(diào)節(jié)中存在的表觀遺傳機制
    1.7 DNA甲基化的研究方法
    1.8 轉(zhuǎn)錄組測序-挖掘關(guān)鍵基因的高效手段
    1.9 研究的目的、意義以及主要內(nèi)容
    1.10 本研究的技術(shù)路線
2 姜黃素和5aza-C對菊花生長表型的影響
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗藥品、試劑及配置
        2.2.1 實驗藥品
        2.2.2 實驗試劑的配制
    2.3 實驗方法
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 5-azaC對組培材料表型的影響
        2.4.2 姜黃素和5aza-C處理對菊花插穗表型的影響
    2.5 討論
        2.5.1 姜黃素和5aza-C處理對菊花表型性狀的影響
        2.5.2 姜黃素和5aza-C處理對菊花花期的影響
3 姜黃素和5-aza C對菊花DNA甲基化水平影響
    3.1 實驗材料
    3.2 MSAP所需藥品、試劑及配置
        3.2.1 實驗藥品
        3.2.2 實驗試劑的配置
    3.3 實驗方法
        3.3.1 MSAP實驗方法
        3.3.2 HPLC實驗方法
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 利用MSAP方法分析姜黃素和5-aza C處理對菊花DNA甲基化影響
        3.4.2 利用HPLC方法分析姜黃素和5-aza C對菊花DNA甲基化影響
    3.5 討論
4 5-azaC處理材料的絕對定量轉(zhuǎn)錄組測序分析
    4.1 實驗材料及處理方法
    4.2 轉(zhuǎn)錄組實驗流程
        4.2.1 菊花葉片RNA的提取
        4.2.2 構(gòu)建測序文庫
        4.2.3 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量質(zhì)控
        4.2.4 UID去重數(shù)據(jù)質(zhì)控
        4.2.5 基因功能注釋
        4.2.6 基因表達量分析
        4.2.7 差異表達基因分析
        4.2.8 測序結(jié)果的qPCR驗證
    4.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
        4.3.1 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制
        4.3.2 UID去重數(shù)據(jù)質(zhì)控
        4.3.3 Nr注釋結(jié)果
        4.3.4 測序數(shù)據(jù)的均一性檢測
        4.3.5 基因表達水平分析
        4.3.6 樣品生物學(xué)重復(fù)相關(guān)性檢測
        4.3.7 差異表達基因篩選
        4.3.8 差異表達聚類分析
        4.3.9 差異表達基因GO功能分類注釋
        4.3.10 差異表達基因KEGG功能分類注釋
        4.3.11 5-aza C處理菊花材料與對照組差異表達基因q RT-PCR結(jié)果驗證
    4.4 討論
        4.4.1 測序結(jié)果分析
        4.4.2 差異表達基因分析
        4.4.3 花期相關(guān)基因分析
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄 10個菊花品種處理后花期對比圖



本文編號：4045448