本文關鍵詞：靶向沉默RIPK4基因對骨肉瘤MG-63細胞生物學特性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究RIPK4(Receptor-interacting-protein kinase 4)基因在骨肉瘤組織及細胞中的表達;通過小干擾RNA沉默骨肉瘤MG-63細胞中RIPK4基因的表達,觀察抑制RIPK4基因后對骨肉瘤MG-63細胞生物學行為的影響。方法:使用免疫組織化學方法和實時熒光定量PCR法分別檢測骨肉瘤患者原發(fā)灶中RIPK4蛋白的表達情況及骨肉瘤細胞中RIPK4mRNA的表達情況;設計具有沉默效應作用的RIPK4siRNA,將其通過載體脂質體轉染入骨肉瘤細胞,使MG-63細胞中RIPK4基因的表達水平下調,CCK-8法檢測骨肉瘤細胞的增殖水平;流式細胞儀檢測細胞凋亡的情況;實時熒光定量PCR法和蛋白質免疫印跡(Western blot)法分別從mRNA及蛋白的表達水平檢測MG-63骨肉瘤細胞中β連環(huán)蛋白(β-catenin),細胞周期蛋白(CyclinD1),細胞凋亡及自噬相關因子Bcl-2、LC3及Beclin1的表達。結果:①免疫組織化學方法檢測顯示骨肉瘤患者標本中RIPK4蛋白表達陽性,實時熒光定量PCR法結果顯示RIPK4mRNA在骨肉瘤細胞中的表達明顯高于正常成骨細胞(P0.05);干擾后,RIPK4siRNA轉染組骨肉瘤MG-63細胞中RIPK4mRNA的轉錄水平及蛋白的表達水平明顯低于陰性對照組(control siRNA組)及空白對照組(未加任何試劑的MG-63細胞)(p0.05);CCK-8檢測骨肉瘤MG-63細胞RIPK4siRNA轉染組較陰性對照組及空白對照組增殖能力明顯受到抑制(p0.05);RIPK4siRNA轉染組骨肉瘤MG-63細胞中β-catenin mRNA及CyclinD1 mRNA及其蛋白的表達水平下調(p0.05);流式細胞儀檢測骨肉瘤細胞轉染組較control siRNA組及空白對照組細胞凋亡率明顯增加(p0.05);RIPK4siRNA轉染組骨肉瘤MG-63細胞中Bcl-2 mRNA及其蛋白表達量下降(p0.05),Beclin1及LC3 mRNA及其蛋白的表達水平上升(p0.05)。結論:①RIPK4蛋白及其mRNA在骨肉瘤組織及骨肉瘤細胞中異常表達,RIPK4基因可能參與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展過程。②沉默RIPK4基因的表達可以抑制人骨肉瘤MG-63細胞的增殖,這一作用可能與抑制Wnt/β-catenin信號通路有關。③沉默RIPK4基因可以促進骨肉瘤MG-63細胞的凋亡和自噬,且兩者之間可能存在一定的聯系。
【關鍵詞】：RIPK4基因 骨肉瘤 免疫組織化學 RNA 細胞增殖 凋亡
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738.1
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 第一章 si RNA下調RIPK4基因表達對人成骨肉瘤MG-63 細胞增殖的抑制作用8-27
• 1 主要實驗材料與試劑8-9
• 2 實驗方法9-16
• 3 結果16-21
• 4 討論21-24
• 5 結論24-25
• 參考文獻25-27
• 第二章 靶向沉默RIPK4基因對骨肉瘤MG-63 細胞凋亡與自噬的影響27-47
• 1 主要實驗試劑與材料27-28
• 2 實驗方法28-35
• 3 結果35-41
• 4 討論41-44
• 5 結論44-45
• 參考文獻45-47
• 綜述47-57
• 參考文獻54-57
• 在學期間的研究成果57-58
• 致謝58

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1 李健,郭衛(wèi),楊榮利,曲華毅,樊瑞峰;影響骨肉瘤預后因素的探討[J];中國骨腫瘤骨病;2004年06期

2 鮑同柱,趙紅衛(wèi),鄭啟新,劉萬軍,劉勇;反義轉化生長因子-β1基因對骨肉瘤細胞表達轉移相關因子的影響[J];中華實驗外科雜志;2005年04期

3 牛聚偉;吳剛;祝少博;漆白文;錢煒;喻愛喜;;血管擴張刺激磷蛋白與骨肉瘤細胞遷移能力的關系[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2012年06期

4 孟令祥,于錫欣,杜德利,王冠忠;P~(16)基因在骨肉瘤中的表達[J];山東醫(yī)藥;1999年06期

5 林娜,蔡宣松,梅炯;骨肉瘤預后因素探討[J];實用腫瘤雜志;2000年05期

6 姜文學,董天華,吳士良,馬文雄;骨肉瘤特異性細胞毒T淋巴細胞的誘導及其抗腫瘤特性的研究[J];中華骨科雜志;2000年01期

7 馬忠泰,栗懷廣,施學東;骨肉瘤的化療與療效判斷[J];中華骨科雜志;2000年S1期

8 岳文,楊連甲,馬明,董紹忠;體內和體外實驗觀察骨形成蛋白在骨肉瘤中的作用[J];口腔頜面外科雜志;2000年03期

9 姜文學,董天華,吳士良,馬文雄;體外誘導骨肉瘤特異性細胞毒T淋巴細胞的實驗研究[J];中國矯形外科雜志;2000年03期

10 郭喬楠,陳意生;骨肉瘤細胞增殖活性的測定及其與預后的關系[J];中國現代醫(yī)學雜志;2000年12期

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1 李紅;龍勉;;力學微擾對骨肉瘤細胞生物學行為的影響[A];第十次中國生物物理學術大會論文摘要集[C];2006年

2 金先慶;羅小輯;;骨肉瘤細胞骨分化標志檢測及臨床意義[A];中國抗癌協會第七屆全國小兒腫瘤學術會議論文匯編[C];2007年

3 李進;楊述華;鄒利軍;邵增務;廖翔;;單啟動子雙表達載體pIRES-p14ARF-p53的構建及其對骨肉瘤細胞增殖的抑制作用[A];泛長江流域骨科新進展暨第九屆全國骨科護理研討會論文匯編[C];2007年

4 李進;楊述華;鄒利軍;邵增務;廖翔;;單啟動子雙表達載體pIRES-p14ARF-p53的構建及其對骨肉瘤細胞增殖的抑制作用[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學術會議論文匯編[C];2007年

5 胡宏偉;孫其志;;骨肉瘤的治療進展[A];第十七屆中國康協肢殘康復學術年會暨第三屆海峽兩岸OS會議論文匯編[C];2008年

6 于秀淳;王偉;;影響骨肉瘤新輔助化療療效的多因素分析[A];第四屆中國腫瘤學術大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術會議教育集[C];2006年

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8 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術期的護理[A];全國第八屆骨科護理學術交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

9 張志明;;外傷誘發(fā)骨肉瘤一例分析[A];第四次全國法醫(yī)學術交流會論文集（上卷）[C];1991年

10 楊迪生;解先寬;葉招明;陶惠民;;反義C-myc重組腺病毒的構建及其抗骨肉瘤細胞作用的實驗研究[A];2004年浙江省骨科學術會議論文匯編[C];2004年

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1 任勇 李運紅 胡顏;莫名關節(jié)痛青少年警惕骨肉瘤[N];天津日報;2006年

2 黃金昶;骨肉瘤可試用斑蝥治療[N];健康報;2005年

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1 劉巍;UHRF1在骨肉瘤細胞侵襲過程中的作用及其機制研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

2 陳杰;HDAC5在骨肉瘤細胞增殖中的表觀遺傳學調控研究[D];復旦大學;2014年

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9 朱U

本文編號：402005