發(fā)布時間：2017-05-28 06:02

  本文關(guān)鍵詞：靶向沉默RIPK4基因?qū)侨饬鯩G-63細(xì)胞生物學(xué)特性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究RIPK4(Receptor-interacting-protein kinase 4)基因在骨肉瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá);通過小干擾RNA沉默骨肉瘤MG-63細(xì)胞中RIPK4基因的表達(dá),觀察抑制RIPK4基因后對骨肉瘤MG-63細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法:使用免疫組織化學(xué)方法和實時熒光定量PCR法分別檢測骨肉瘤患者原發(fā)灶中RIPK4蛋白的表達(dá)情況及骨肉瘤細(xì)胞中RIPK4mRNA的表達(dá)情況;設(shè)計具有沉默效應(yīng)作用的RIPK4siRNA,將其通過載體脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入骨肉瘤細(xì)胞,使MG-63細(xì)胞中RIPK4基因的表達(dá)水平下調(diào),CCK-8法檢測骨肉瘤細(xì)胞的增殖水平;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡的情況;實時熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)法分別從mRNA及蛋白的表達(dá)水平檢測MG-63骨肉瘤細(xì)胞中β連環(huán)蛋白(β-catenin),細(xì)胞周期蛋白(CyclinD1),細(xì)胞凋亡及自噬相關(guān)因子Bcl-2、LC3及Beclin1的表達(dá)。結(jié)果:①免疫組織化學(xué)方法檢測顯示骨肉瘤患者標(biāo)本中RIPK4蛋白表達(dá)陽性,實時熒光定量PCR法結(jié)果顯示RIPK4mRNA在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常成骨細(xì)胞(P0.05);干擾后,RIPK4siRNA轉(zhuǎn)染組骨肉瘤MG-63細(xì)胞中RIPK4mRNA的轉(zhuǎn)錄水平及蛋白的表達(dá)水平明顯低于陰性對照組(control siRNA組)及空白對照組(未加任何試劑的MG-63細(xì)胞)(p0.05);CCK-8檢測骨肉瘤MG-63細(xì)胞RIPK4siRNA轉(zhuǎn)染組較陰性對照組及空白對照組增殖能力明顯受到抑制(p0.05);RIPK4siRNA轉(zhuǎn)染組骨肉瘤MG-63細(xì)胞中β-catenin mRNA及CyclinD1 mRNA及其蛋白的表達(dá)水平下調(diào)(p0.05);流式細(xì)胞儀檢測骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染組較control siRNA組及空白對照組細(xì)胞凋亡率明顯增加(p0.05);RIPK4siRNA轉(zhuǎn)染組骨肉瘤MG-63細(xì)胞中Bcl-2 mRNA及其蛋白表達(dá)量下降(p0.05),Beclin1及LC3 mRNA及其蛋白的表達(dá)水平上升(p0.05)。結(jié)論:①RIPK4蛋白及其mRNA在骨肉瘤組織及骨肉瘤細(xì)胞中異常表達(dá),RIPK4基因可能參與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展過程。②沉默RIPK4基因的表達(dá)可以抑制人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的增殖,這一作用可能與抑制Wnt/β-catenin信號通路有關(guān)。③沉默RIPK4基因可以促進骨肉瘤MG-63細(xì)胞的凋亡和自噬,且兩者之間可能存在一定的聯(lián)系。
【關(guān)鍵詞】：RIPK4基因 骨肉瘤 免疫組織化學(xué) RNA 細(xì)胞增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R738.1
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 第一章 si RNA下調(diào)RIPK4基因表達(dá)對人成骨肉瘤MG-63 細(xì)胞增殖的抑制作用8-27
• 1 主要實驗材料與試劑8-9
• 2 實驗方法9-16
• 3 結(jié)果16-21
• 4 討論21-24
• 5 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二章 靶向沉默RIPK4基因?qū)侨饬鯩G-63 細(xì)胞凋亡與自噬的影響27-47
• 1 主要實驗試劑與材料27-28
• 2 實驗方法28-35
• 3 結(jié)果35-41
• 4 討論41-44
• 5 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 綜述47-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 在學(xué)期間的研究成果57-58
• 致謝58

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李健,郭衛(wèi),楊榮利,曲華毅,樊瑞峰;影響骨肉瘤預(yù)后因素的探討[J];中國骨腫瘤骨病;2004年06期

2 鮑同柱,趙紅衛(wèi),鄭啟新,劉萬軍,劉勇;反義轉(zhuǎn)化生長因子-β1基因?qū)侨饬黾?xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的影響[J];中華實驗外科雜志;2005年04期

3 牛聚偉;吳剛;祝少博;漆白文;錢煒;喻愛喜;;血管擴張刺激磷蛋白與骨肉瘤細(xì)胞遷移能力的關(guān)系[J];武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

4 孟令祥,于錫欣,杜德利,王冠忠;P~(16)基因在骨肉瘤中的表達(dá)[J];山東醫(yī)藥;1999年06期

5 林娜,蔡宣松,梅炯;骨肉瘤預(yù)后因素探討[J];實用腫瘤雜志;2000年05期

6 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)及其抗腫瘤特性的研究[J];中華骨科雜志;2000年01期

7 馬忠泰,栗懷廣,施學(xué)東;骨肉瘤的化療與療效判斷[J];中華骨科雜志;2000年S1期

8 岳文,楊連甲,馬明,董紹忠;體內(nèi)和體外實驗觀察骨形成蛋白在骨肉瘤中的作用[J];口腔頜面外科雜志;2000年03期

9 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;體外誘導(dǎo)骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的實驗研究[J];中國矯形外科雜志;2000年03期

10 郭喬楠,陳意生;骨肉瘤細(xì)胞增殖活性的測定及其與預(yù)后的關(guān)系[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2000年12期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李紅;龍勉;;力學(xué)微擾對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

2 金先慶;羅小輯;;骨肉瘤細(xì)胞骨分化標(biāo)志檢測及臨床意義[A];中國抗癌協(xié)會第七屆全國小兒腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

3 李進;楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];泛長江流域骨科新進展暨第九屆全國骨科護理研討會論文匯編[C];2007年

4 李進;楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 胡宏偉;孫其志;;骨肉瘤的治療進展[A];第十七屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會暨第三屆海峽兩岸OS會議論文匯編[C];2008年

6 于秀淳;王偉;;影響骨肉瘤新輔助化療療效的多因素分析[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議教育集[C];2006年

7 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護理[A];全國腫瘤護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

8 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護理[A];全國第八屆骨科護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

9 張志明;;外傷誘發(fā)骨肉瘤一例分析[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文集（上卷）[C];1991年

10 楊迪生;解先寬;葉招明;陶惠民;;反義C-myc重組腺病毒的構(gòu)建及其抗骨肉瘤細(xì)胞作用的實驗研究[A];2004年浙江省骨科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 任勇 李運紅 胡顏;莫名關(guān)節(jié)痛青少年警惕骨肉瘤[N];天津日報;2006年

2 黃金昶;骨肉瘤可試用斑蝥治療[N];健康報;2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉巍;UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞侵襲過程中的作用及其機制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳杰;HDAC5在骨肉瘤細(xì)胞增殖中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 馬萬里;miR-148a在骨肉瘤患者體內(nèi)的表達(dá)及其功能機制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 田吉光;CD271~+骨肉瘤干細(xì)胞特性研究及以DNA-PK為靶點逆轉(zhuǎn)骨肉瘤化療耐藥性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 成功;內(nèi)臟脂肪素對U2OS細(xì)胞株遷移與侵襲的影響及其機制的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 方永超;環(huán)氧化酶-2和miR-143在骨肉瘤中的表達(dá)和臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 趙健;microRNA-21在骨肉瘤細(xì)胞MG63中作用機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 韓康;microRNA-194在骨肉瘤中作用及機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 朱U

本文編號：402005