利用同源克隆技術(shù)得到黃毛草莓(Fragaria nilgerrensis Schlecht. ex Gay)中編碼NB-ARC結(jié)構(gòu)域的抗病相關(guān)基因FnCN及啟動(dòng)子序列。序列分析結(jié)果表明:FnCN基因開放閱讀框的長(zhǎng)度為933 bp(GenBank登錄號(hào)MN240290),編碼310個(gè)氨基酸殘基,其N端有1個(gè)Rx-CC結(jié)構(gòu)域,C端有1個(gè)保守的NB-ARC結(jié)構(gòu)域。該基因起始密碼子上游啟動(dòng)子pFnCN序列的長(zhǎng)度為910 bp(GenBank登錄號(hào)MN240291),包含TATA-box、CAAT-box、激素響應(yīng)元件、干旱誘導(dǎo)MYB結(jié)合位點(diǎn)、光響應(yīng)元件和厭氧誘導(dǎo)順式作用元件等。氨基酸序列的同源性比對(duì)結(jié)果表明:黃毛草莓FnCN基因與野草莓(Fragaria vesca Linn.)CN基因編碼氨基酸序列的相似性最高(95.16%)。成功構(gòu)建了黃毛草莓FnCN基因的植物過表達(dá)載體pCAMBIA1301-HA-FnCN和病毒誘導(dǎo)基因沉默載體pTRV2-FnCN。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明:黃毛草莓葉片接種膠孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Sa...

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圖1黃毛草莓FnCN基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

根據(jù)獲得的黃毛草莓轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)與野草莓(FragariavescaLinn.)相同的unigene,通過Primer5.0軟件設(shè)計(jì),利用引物FnCN-F和FnCN-R,以黃毛草莓葉片cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到1個(gè)長(zhǎng)度約1000bp的條帶(圖1)。然后進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化、....

圖2黃毛草莓FnCN基因的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列

圖1黃毛草莓FnCN基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果2.1.2啟動(dòng)子克隆及序列分析

圖3黃毛草莓FnCN基因啟動(dòng)子的PCR擴(kuò)增結(jié)果

利用引物P-FnCN-F和P-FnCN-R從黃毛草莓基因組DNA中擴(kuò)增得到1個(gè)長(zhǎng)度約900bp的啟動(dòng)子條帶(圖3)。測(cè)序結(jié)果顯示,該啟動(dòng)子序列的長(zhǎng)度為910bp,命名為pFnCN(GenBank登錄號(hào)MN240291)。利用PlantCARE數(shù)據(jù)庫對(duì)該序列進(jìn)行順式作用元件預(yù)測(cè)....

圖4黃毛草莓FnCN基因啟動(dòng)子序列及其順式作用元件

圖3黃毛草莓FnCN基因啟動(dòng)子的PCR擴(kuò)增結(jié)果2.2黃毛草莓FnCN基因編碼氨基酸序列的理化性質(zhì)及同源性分析

本文編號(hào)：3982810