利用同源克隆技術(shù)得到黃毛草莓(Fragaria nilgerrensis Schlecht. ex Gay)中編碼NB-ARC結(jié)構(gòu)域的抗病相關(guān)基因FnCN及啟動子序列。序列分析結(jié)果表明:FnCN基因開放閱讀框的長度為933 bp(GenBank登錄號MN240290),編碼310個氨基酸殘基,其N端有1個Rx-CC結(jié)構(gòu)域,C端有1個保守的NB-ARC結(jié)構(gòu)域。該基因起始密碼子上游啟動子pFnCN序列的長度為910 bp(GenBank登錄號MN240291),包含TATA-box、CAAT-box、激素響應(yīng)元件、干旱誘導(dǎo)MYB結(jié)合位點、光響應(yīng)元件和厭氧誘導(dǎo)順式作用元件等。氨基酸序列的同源性比對結(jié)果表明:黃毛草莓FnCN基因與野草莓(Fragaria vesca Linn.)CN基因編碼氨基酸序列的相似性最高(95.16%)。成功構(gòu)建了黃毛草莓FnCN基因的植物過表達載體pCAMBIA1301-HA-FnCN和病毒誘導(dǎo)基因沉默載體pTRV2-FnCN。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果表明:黃毛草莓葉片接種膠孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Sa...

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圖1黃毛草莓FnCN基因的PCR擴增結(jié)果

根據(jù)獲得的黃毛草莓轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)與野草莓(FragariavescaLinn.)相同的unigene,通過Primer5.0軟件設(shè)計,利用引物FnCN-F和FnCN-R,以黃毛草莓葉片cDNA為模板進行PCR擴增,得到1個長度約1000bp的條帶(圖1)。然后進行連接轉(zhuǎn)化、....

圖2黃毛草莓FnCN基因的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列

圖1黃毛草莓FnCN基因的PCR擴增結(jié)果2.1.2啟動子克隆及序列分析

圖3黃毛草莓FnCN基因啟動子的PCR擴增結(jié)果

利用引物P-FnCN-F和P-FnCN-R從黃毛草莓基因組DNA中擴增得到1個長度約900bp的啟動子條帶(圖3)。測序結(jié)果顯示,該啟動子序列的長度為910bp,命名為pFnCN(GenBank登錄號MN240291)。利用PlantCARE數(shù)據(jù)庫對該序列進行順式作用元件預(yù)測....

圖4黃毛草莓FnCN基因啟動子序列及其順式作用元件

圖3黃毛草莓FnCN基因啟動子的PCR擴增結(jié)果2.2黃毛草莓FnCN基因編碼氨基酸序列的理化性質(zhì)及同源性分析

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