檸檬酸合成酶、順烏頭酸酶對(duì)檸檬酸循環(huán)強(qiáng)度影響較大,因此克隆兩酶的基因,導(dǎo)入產(chǎn)富馬酸菌StrainABCDIA,使富馬酸產(chǎn)量在前人基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高;然后,為了探究胞內(nèi)NAD+/NADH 比值對(duì)富馬酸積累的影響,在產(chǎn)富馬酸菌StrainABCDIA內(nèi)分別導(dǎo)入異源NADH氧化酶基因及自源轉(zhuǎn)氫酶基因,富馬酸單位質(zhì)量產(chǎn)量為0.54 g/g菌體和0.67 g/g菌體,雖然生物量不及StrainABCDIA,但菌體自身的產(chǎn)酸能力得到增強(qiáng),說(shuō)明輔因子的調(diào)節(jié)有利于富馬酸的積累。后對(duì)之前的研究進(jìn)行整合優(yōu)化,得到EcS、EcN、CgS、CgN四株菌。以改良的M9培養(yǎng)基進(jìn)行重組菌的搖瓶發(fā)酵,在生物量和富馬酸產(chǎn)量上,四株菌都比對(duì)照菌StrainABCDIA高,但是整體相差不大。其中CgS富馬酸產(chǎn)量較高,達(dá)到0.511 g/L。但由于生長(zhǎng)情況較差,這個(gè)產(chǎn)量沒(méi)有達(dá)到預(yù)期。但對(duì)比菌體單位質(zhì)量產(chǎn)量,CgS富馬酸產(chǎn)量可以達(dá)到0.937 g/g菌體,與對(duì)照菌株StrainABCDIA單位產(chǎn)量相比提高20%,與其他菌株相比優(yōu)勢(shì)較為明顯。從細(xì)胞內(nèi)的輔因子NAD+/NADH來(lái)看,CgS比StrainABCDIA提高了40.24%...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１富馬酸分子結(jié)構(gòu)式??Ｆｉｇ．?１－１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｆｕｍａｒｉｃ?ａｃｉｄ??

?第一章緒論???第一章緒論??１．１富馬酸概述??１．１．１富馬酸的理化性質(zhì)??富馬酸，分子式為Ｃ４Ｈ４〇４，分子量為１１６．０７，結(jié)構(gòu)式如圖１－１所示。它是具有最??簡(jiǎn)單結(jié)構(gòu)的不飽和二羧酸，包含有一個(gè)碳－碳雙鍵和兩個(gè)羧基。??ＨＯＯＣ?Ｈ??＼＝／??／?＼??Ｈ?ＣＯＯＨ?....

圖１－２富馬酸的應(yīng)用??Ｆｉｇ．?１－２?Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｕｍａｒｉｃ?ａｃｉｄ??

費(fèi)產(chǎn)品主要是檸檬酸，而富馬酸也是一種??很好的食品酸味劑，而且具有顯著的抗菌防腐作用。隨著其發(fā)展和推廣，富馬酸在食??品中的份額將繼續(xù)增加。此外，采用酶工程技術(shù)，以富馬酸酶為催化劑，富馬酸鹽經(jīng)??“晶體轉(zhuǎn)化反應(yīng)”轉(zhuǎn)化為蘋果酸，進(jìn)一步加工的Ｌ－蘋果酸可用于制酯及復(fù)合劑和調(diào)味??劑。....

圖１－６尿素循環(huán)途徑＿??Ｆｉｇ．?１－６?Ｔｈｅ?ｕｒｅａ?ｃｙｃｌｅ?ｐａｔｈｗａｙ??據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，Ｙｕ等人［４６］的研宄中證明氨基酸和脂肪酸的代謝，對(duì)富馬酸的積累??

ＴＰ??＾Ｃａｒｂａｍｏｙｌ－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ??Ｙ?ｓｙｎｔｈａｓｅ?Ｉ??Ｃａｒｂａｍｏｙｌ－Ｐ????ｌ＾ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ??ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ?＾ｓｊｒａｎｓｃａｒｂａｎｏｙｌａｓｅ??／?Ｃｉｔｒｕｌｉｎｅ??Ｉ?ａｒｇｉｎｉｏｓｕｃｃｉｎａｔｅＸ??ｕｒｅａ?（?....

圖１－８?ＮＡＤＰ＋與ＮＡＤＰＨ轉(zhuǎn)化圖??－＋

?北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文???Ｆｉｇ．１－７?Ｔｈｅ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＮＡＤ＋ａｎｄ?ＮＡＤＨ??基因于大腸桿菌中屬于自源表達(dá)，它更傾向于間接控制ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ比例。??對(duì)Ｍ編碼可溶性吡啶核苷酸轉(zhuǎn)氫酶，該酶具有ＮＡＤＰＨ、ＦＡＤ和二聚結(jié)合位點(diǎn)。由于??如....

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