豬(Sus scrofa)β1,4 N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶(β1,4 N-acetylgalactosaminyl transferase,β4GalNT2)及其產(chǎn)物是引起異種移植排斥反應(yīng)的重要非半乳糖(Gal)抗原之一。為了進一步降低異種移植排斥反應(yīng),本研究在α-1,3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)敲除的巴馬小型豬基礎(chǔ)上,利用規(guī)律成簇間隔短回文重復(fù)/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)技術(shù)制備β4GalNT2基因敲除豬。首先設(shè)計靶向豬β4GalNT2基因的單鏈導(dǎo)向RNA(single guide RNA,sgRNA),構(gòu)建sgRNA表達(dá)載體,將其電轉(zhuǎn)染GGTA1基因敲除豬耳成纖維細(xì)胞,進行單細(xì)胞培養(yǎng),采用PCR、TA克隆及測序的方法鑒定單細(xì)胞克隆的突變類型。選擇β4GalNT2基因突變的單細(xì)胞克隆為核供體,通過體細(xì)胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技術(shù)制備β...

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圖12Westernblot鑒定克隆點中hCD55蛋白表達(dá)Figure12Theidentificationofwesternblot725570hCD55

本文編號：3972021