燕麥屬于禾本科燕麥屬(Avena L.),一年生草本植物,是重要的糧食及飼草、飼料作物。化學(xué)除草劑的出現(xiàn)及廣泛使用為田間除草帶來了有效且省工的辦法�！澳貌秲簟庇置『锑�,是一種選擇性除草劑,使用“拿捕凈”清除燕麥田間的禾本科雜草時(shí)會(huì)對燕麥造成傷害,限制了除草劑對燕麥田間禾本科雜草的清除。乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)是植物代謝過程中催化植物脂肪酸合成的關(guān)鍵酶、限速酶,是“拿捕凈”除草劑作用的靶蛋白,“拿捕凈”識別ACCase的蛋白結(jié)構(gòu)并與之相結(jié)合,從而達(dá)到抑制ACCase活性的目的,使脂類代謝受阻,進(jìn)而殺死禾本科雜草。本研究克隆甜燕1號(sweety 1)的ACCase的CT區(qū)序列,進(jìn)行生物信息學(xué)分析;構(gòu)建CRISPR/Cas9基因編輯載體,通過基因槍轉(zhuǎn)化法將載體導(dǎo)入甜燕1號(sweety 1)成熟胚中,以期獲得抗“拿捕凈”燕麥新種質(zhì)。研究得到以下結(jié)果:1.利用同源序列克隆的方法,得到燕麥ACCase基因的CT區(qū)序列的2188bp,與已經(jīng)報(bào)道的小麥(Triticum aestivum)、日本看麥娘(Alopecurus japonicus)、大穗看麥娘(Alopecurus myos...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1技術(shù)路線圖

賦予該品種抗“拿捕凈”除草劑特性,得到抗“拿捕凈”的新品種。1.7試驗(yàn)技術(shù)路線圖圖1技術(shù)路線圖Fig.1Technologyroadmap19

圖2甜燕1號的籽粒形態(tài)與脫皮后的形態(tài)

試驗(yàn)所用材料均種植于實(shí)驗(yàn)室花盆中。如圖2。甜燕1號籽粒的形態(tài)以及脫皮后的形態(tài)。圖2甜燕1號的籽粒形態(tài)與脫皮后的形態(tài)Fig.2ThestateofskinandpeelingofSweety1將燕麥幼苗用無菌無酶剪刀剪下，DEPC水處理約3-4次，無....

圖3轉(zhuǎn)基因燕麥的生長周期狀態(tài)Fig.3Thegrowthstateofgeneticallymodifiedoats

6%的次氯酸鈉將所得到的燕麥成熟胚浸泡10分鐘，無菌水沖洗6-7次。然后將胚置于MS培養(yǎng)基（pH=5.8）上，每個(gè)培養(yǎng)皿上放置約20-30個(gè)胚，將其放置為一個(gè)圓圈（以便后期的基因槍轟擊），見圖3，隨后將其置于22攝氏度的溫室里過夜培養(yǎng)。3.3.3轟擊前后外植體的處理將完整的燕麥....

圖4燕麥組織總RNA提取Fig.4TotalRNAagarosegelelectrophoresisinA.sativa

4結(jié)果與分析4.1燕麥總RNA檢測利用Trizol法提取燕麥總RNA，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果見圖4，圖中的28S、18S與5SRNA三條條帶清晰，燕麥總RNA沒有發(fā)生降解，可用于反轉(zhuǎn)錄及后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。圖4燕麥組織總RNA提取Fig.4TotalRNAaga....

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