發(fā)布時間：2024-05-10 20:19

　　植物特有的NAC(NAM,ATAF1/2和CUC2)轉(zhuǎn)錄因子在逆境響應(yīng)等過程中起重要作用。在前期工作中,從剛毛檉柳中克隆獲得了 ThNAC7基因,通過轉(zhuǎn)化擬南芥證明該基因具有一定的耐鹽能力。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對ThNAC7基因的耐鹽、抗旱功能進(jìn)行研究,從而為闡明該基因的抗逆調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。本研究中,將ThNAC7與其他9種植物的NAC蛋白進(jìn)行多序列比對,表明ThNAC7保守結(jié)構(gòu)域在N端;將其與擬南芥中105個、剛毛檉柳中88個NAC蛋白進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹分析,發(fā)現(xiàn)ThNAC7與ANAC091、ANAC062 及 ThNAC35 的親緣關(guān)系較近;通過構(gòu)建 pBI121-GFP-ThNAC7 熒光定位表達(dá)載體進(jìn)行亞細(xì)胞定位,結(jié)果表明ThNAC7蛋白定位在細(xì)胞核中。構(gòu)建了ThNAC7基因過表達(dá)載體(pROKⅡ-ThNAC7)及抑制表達(dá)載體(pFGC5941-ThNAC7),將二者與空pROKⅡ載體利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的高效瞬時轉(zhuǎn)化體系,得到三種瞬時轉(zhuǎn)基因植株。在鹽、干旱脅迫下分析三者間二氨基聯(lián)苯胺(DAB)與硝基四氮唑藍(lán)(NBT)染色;過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;脯氨酸(PR...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 前言
    1.2 植物轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        1.2.1 植物bHLH轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.2 植物bZIP轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.3 植物WRKY轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.4 植物MYB轉(zhuǎn)錄因子
    1.3 植物NAC轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.1 結(jié)構(gòu)特點
        1.3.2 研究現(xiàn)狀
    1.4 本研究目的及意義
    1.5 技術(shù)路線
2 ThNAC7基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 ThNAC7基因的EST序列
        2.1.2 植物材料
        2.1.3 菌種與載體
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 溶液制備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 剛毛檉柳植株總RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 ThNAC7基因的克隆
        2.2.3 ThNAC7基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.4 ThNAC7基因的亞細(xì)胞定位
        2.2.5 鹽、干旱脅迫下ThNAC7基因在剛毛檉柳不同組織中的表達(dá)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 ThNAC7基因的克隆
        2.3.2 ThNAC7基因的多序列比對
        2.3.3 ThNAC7蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹
        2.3.4 ThNAC7基因的亞細(xì)胞定位
        2.3.5 鹽、干旱脅迫下ThNAC7基因在剛毛檉柳不同組織中的表達(dá)分析
    2.4 本章小結(jié)
3 ThNAC7基因在剛毛檉柳中的抗逆功能分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌種與載體
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 過表達(dá)載體pROK Ⅱ -ThNAC7的構(gòu)建
        3.2.2 抑制表達(dá)載體pFGC5941-ThNAC7的構(gòu)建
        3.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的高效瞬時轉(zhuǎn)化法侵染剛毛檉柳
        3.2.4 瞬時轉(zhuǎn)化剛毛檉柳中ThNAC7基因的表達(dá)分析
        3.2.5 瞬時轉(zhuǎn)化剛毛檉柳的組織化學(xué)染色分析
        3.2.6 瞬時轉(zhuǎn)化剛毛檉柳的生理生化指標(biāo)分析
        3.2.7 剛毛檉柳脯氨酸合成基因的表達(dá)分析
        3.2.8 ThPODs與ThSODs基因的表達(dá)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 過表達(dá)載體pROK Ⅱ-ThNAC7的構(gòu)建
        3.3.2 抑制表達(dá)載體pFGC5941-ThNAC7的構(gòu)建
        3.3.3 瞬時轉(zhuǎn)化剛毛檉柳中ThNAC7基因的表達(dá)分析
        3.3.4 瞬時轉(zhuǎn)化剛毛檉柳的組織化學(xué)染色分析
        3.3.5 瞬時轉(zhuǎn)化剛毛檉柳的生理生化指標(biāo)分析
        3.3.6 剛毛檉柳脯氨酸合成基因的表達(dá)分析
        3.3.7 ThSODs和ThPODs基因的表達(dá)分析
    3.4 本章小結(jié)
4 過表達(dá)ThNAC7基因擬南芥的抗逆功能分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌種與載體
        4.1.3 主要試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 過表達(dá)ThNAC7擬南芥的獲得與篩選鑒定
        4.2.2 過表達(dá)ThNAC7擬南芥T₃代植株ThNAC7基因的表達(dá)分析
        4.2.3 過表達(dá)ThNAC7擬南芥幼苗的抗逆分析
        4.2.4 過表達(dá)ThNAC7擬南芥成苗的抗逆分析
        4.2.5 過表達(dá)ThNAC7擬南芥的組織化學(xué)染色分析
        4.2.6 過表達(dá)ThNAC7擬南芥的生理生化指標(biāo)分析
        4.2.7 擬南芥脯氨酸合成基因的表達(dá)分析
        4.2.8 擬南芥SODs和PODs基因的表達(dá)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 過表達(dá)ThNAC7擬南芥的獲得與篩選鑒定
        4.3.2 過表達(dá)ThNAC7擬南芥T₃代植株ThNAC7基因的表達(dá)分析
        4.3.3 過表達(dá)ThNAC7擬南芥幼苗的抗逆分析
        4.3.4 過表達(dá)ThNAC7擬南芥成苗的抗逆分析
        4.3.5 過表達(dá)ThNAC7擬南芥的組織化學(xué)染色分析
        4.3.6 過表達(dá)ThNAC7擬南芥的生理生化指標(biāo)分析
        4.3.7 擬南芥脯氨酸合成基因的表達(dá)分析
        4.3.8 擬南芥SODs和PODs基因的表達(dá)分析
    4.4 本章小結(jié)
5 ThNAC7轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的基因的研究
    5.1 實驗材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 材料處理
    5.2 實驗方法
        5.2.1 RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
        5.2.2 文庫構(gòu)建與測序
        5.2.3 驗證轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果
        5.2.4 差異基因的分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 驗證轉(zhuǎn)錄組結(jié)果的可靠性
        5.3.2 差異表達(dá)基因分析
    5.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3968968