目的:人巨細(xì)胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)潛伏感染在人群中占50%以上,在健康的成年人中通常表現(xiàn)為潛伏感染,但在免疫功能缺陷的患者和新生兒中會(huì)引起致命的感染。HCMV感染胎兒導(dǎo)致先天性巨細(xì)胞病毒(Congenital cytomegalovirus,cCMV)感染,是危害嬰兒圍生期健康的重要因素。cCMV感染的致病機(jī)制一直以來都是病毒學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。HCMV是基因組最大的人感染病毒之一,預(yù)測能編碼165個(gè)開放閱讀框架(open reading frame,ORF),長而復(fù)雜的基因組決定了其復(fù)雜的編碼能力,存在正義轉(zhuǎn)錄、反義轉(zhuǎn)錄、可變剪切、非編碼轉(zhuǎn)錄等多種方式。HCMV的非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)從基因組轉(zhuǎn)錄而來,在RNA水平行使各種生物學(xué)功能。目前,HCMV的ncRNA轉(zhuǎn)錄本特征和功能尚未研究清楚,明確轉(zhuǎn)錄本結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄時(shí)相與轉(zhuǎn)錄方式,對于揭示HCMV ncRNA功能及致病機(jī)制具有十分重要的意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類不具有編碼蛋白質(zhì)能力,長度大于200個(gè)核苷酸的R...

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :人巨細(xì)胞病毒RNA1.2基因區(qū)新發(fā)現(xiàn)一簇天然反義轉(zhuǎn)錄本及其結(jié)構(gòu)的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 病毒標(biāo)本
            2.1.2 細(xì)胞系
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 HCMV Han株與v HAN-BAC株的接種與傳代培養(yǎng)
            2.2.3 蝕斑法測定HCMV Han株滴度
            2.2.4 v HAN-BAC株病毒顆粒純化
            2.2.5 v HAN-BAC病毒顆粒滴度測定
            2.2.6 HCMV感染HELF不同時(shí)期總RNA的制備和收集[30]
            2.2.7 總RNA提取
            2.2.8 總RNA樣本去除DNA
            2.2.9 病毒基因組DNA提取
            2.2.10 病毒感染HELF細(xì)胞的總RNA鏈特異性高通量測序
            2.2.11 引物設(shè)計(jì)
            2.2.12 Northern boltting
            2.2.13 RACE(Rapid amplification of c DNA ends)
            2.2.14 BLAST和序列分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 HCMV臨床分離株RNA-seq結(jié)果
        3.2 HCMV感染對人類宿主細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄的影響
        3.3 RNA1.2基因區(qū)域的反義轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象
        3.4 RNA1.2 AST的 Northern bolt鑒定
        3.5 RNA1.2 ASTs的 RACE結(jié)果
        3.6 RNA1.2 ASTs序列特征分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :人巨細(xì)胞病毒RNA1.2 ASTs功能初探
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 病毒標(biāo)本、細(xì)胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、病毒毒株制備、病毒顆粒純化
            2.2.2 反義寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASO)干擾下調(diào)RNA1.2 ASTs
            2.2.3 總RNA提取、Northern blotting
            2.2.4 RNA pull down
            2.2.5 蛋白質(zhì)譜分析
            2.2.6 提取細(xì)胞總蛋白
            2.2.7 蛋白濃度定量(BCA法)
            2.2.8 蛋白免疫印跡(Western blotting)
            2.2.9 蛋白免疫印跡相關(guān)液體的配制
            2.2.10 差異基因的富集分析
    3 結(jié)果
        3.1 下調(diào)RNA1.2ASTs的表達(dá)對RNA1.2 表達(dá)水平的影響
        3.2 RNA1.2 ASTs結(jié)合蛋白捕獲及鑒定
        3.3 RNA1.2 ASTs結(jié)合蛋白生物功能富集分析
        3.4 RNA1.2ASTs結(jié)合蛋白的Western blot驗(yàn)證
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3962478