目的:人巨細胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)潛伏感染在人群中占50%以上,在健康的成年人中通常表現(xiàn)為潛伏感染,但在免疫功能缺陷的患者和新生兒中會引起致命的感染。HCMV感染胎兒導致先天性巨細胞病毒(Congenital cytomegalovirus,cCMV)感染,是危害嬰兒圍生期健康的重要因素。cCMV感染的致病機制一直以來都是病毒學領域的研究熱點之一。HCMV是基因組最大的人感染病毒之一,預測能編碼165個開放閱讀框架(open reading frame,ORF),長而復雜的基因組決定了其復雜的編碼能力,存在正義轉錄、反義轉錄、可變剪切、非編碼轉錄等多種方式。HCMV的非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)從基因組轉錄而來,在RNA水平行使各種生物學功能。目前,HCMV的ncRNA轉錄本特征和功能尚未研究清楚,明確轉錄本結構、轉錄時相與轉錄方式,對于揭示HCMV ncRNA功能及致病機制具有十分重要的意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類不具有編碼蛋白質能力,長度大于200個核苷酸的R...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :人巨細胞病毒RNA1.2基因區(qū)新發(fā)現(xiàn)一簇天然反義轉錄本及其結構的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 病毒標本
            2.1.2 細胞系
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 HCMV Han株與v HAN-BAC株的接種與傳代培養(yǎng)
            2.2.3 蝕斑法測定HCMV Han株滴度
            2.2.4 v HAN-BAC株病毒顆粒純化
            2.2.5 v HAN-BAC病毒顆粒滴度測定
            2.2.6 HCMV感染HELF不同時期總RNA的制備和收集[30]
            2.2.7 總RNA提取
            2.2.8 總RNA樣本去除DNA
            2.2.9 病毒基因組DNA提取
            2.2.10 病毒感染HELF細胞的總RNA鏈特異性高通量測序
            2.2.11 引物設計
            2.2.12 Northern boltting
            2.2.13 RACE(Rapid amplification of c DNA ends)
            2.2.14 BLAST和序列分析
    3 實驗結果
        3.1 HCMV臨床分離株RNA-seq結果
        3.2 HCMV感染對人類宿主細胞基因轉錄的影響
        3.3 RNA1.2基因區(qū)域的反義轉錄現(xiàn)象
        3.4 RNA1.2 AST的 Northern bolt鑒定
        3.5 RNA1.2 ASTs的 RACE結果
        3.6 RNA1.2 ASTs序列特征分析
    4 討論
    5 結論
第二部分 :人巨細胞病毒RNA1.2 ASTs功能初探
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 病毒標本、細胞系
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)、病毒毒株制備、病毒顆粒純化
            2.2.2 反義寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASO)干擾下調RNA1.2 ASTs
            2.2.3 總RNA提取、Northern blotting
            2.2.4 RNA pull down
            2.2.5 蛋白質譜分析
            2.2.6 提取細胞總蛋白
            2.2.7 蛋白濃度定量(BCA法)
            2.2.8 蛋白免疫印跡(Western blotting)
            2.2.9 蛋白免疫印跡相關液體的配制
            2.2.10 差異基因的富集分析
    3 結果
        3.1 下調RNA1.2ASTs的表達對RNA1.2 表達水平的影響
        3.2 RNA1.2 ASTs結合蛋白捕獲及鑒定
        3.3 RNA1.2 ASTs結合蛋白生物功能富集分析
        3.4 RNA1.2ASTs結合蛋白的Western blot驗證
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3962478