為了探究來(lái)源于馬鈴薯中的StBAG3基因在馬鈴薯抗性建立過(guò)程中可能具有的功能,以夏坡蒂馬鈴薯的離體葉片為試驗(yàn)材料,利用馬鈴薯的瞬時(shí)表達(dá)體系對(duì)StBAG3基因的功能進(jìn)行了初步的研究。結(jié)果表明,在瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因的馬鈴薯離體葉片上人工接種馬鈴薯晚疫病菌,24,48,72,96 h后接種位置病斑的相對(duì)面積較對(duì)照病斑顯著減少了1.92～39.15百分點(diǎn),說(shuō)明瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因后顯著提高了馬鈴薯對(duì)晚疫病菌的抗性水平。這一結(jié)果也從對(duì)接種部位壞死細(xì)胞的染色中得到了證實(shí)。H₂O₂定性和定量測(cè)定的結(jié)果表明,瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因后接種部位H₂0₂積累量在接種后0～48 h差異不顯著,接種后72,96 h與對(duì)照差異顯著,二者均在72 h達(dá)到最大值,分別為0.146,0.086μmol/g。ROS清除酶活性測(cè)定的結(jié)果表明,接種后瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因部位SOD和CAT的活性隨著接種時(shí)間推移,變化的模式有所差異,但二者在0～96 h均高于對(duì)照葉片,而POD的活性在接種后0～72 h與對(duì)照葉片沒(méi)有顯著差異,...

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【部分圖文】：

圖1馬鈴薯離體葉片瞬時(shí)表達(dá)StBAG3后接種晚疫菌的示意圖

將在黑麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)20d的致病疫霉菌轉(zhuǎn)入裝有無(wú)菌水的離心管中,4℃下放置3h誘導(dǎo)游動(dòng)孢子的釋放,將孢子濃度調(diào)至1×106個(gè)/mL。在葉片的右側(cè)接種10μL的孢子液,葉片的左側(cè)接種水作為對(duì)照。將接種葉片放置在光照培養(yǎng)箱中(光照16h,黑暗8h,溫度為18～22℃,....

圖2瞬時(shí)表達(dá)StBAG3后接種晚疫菌病斑的變化

為了探究StBAG3基因在馬鈴薯抵抗晚疫病菌侵染過(guò)程中的作用,以瞬時(shí)表達(dá)空載體后接種晚疫菌的葉片部位作為對(duì)照,測(cè)定了在瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因的馬鈴薯離體葉片上接種晚疫病菌后不同時(shí)間點(diǎn)病斑的大小,結(jié)果表明(圖2),接種48h后,當(dāng)對(duì)照的葉片部位開(kāi)始出現(xiàn)水漬狀的病斑,而瞬時(shí)表達(dá)S....

圖3瞬時(shí)表達(dá)StBAG3葉片接種晚疫菌后死亡細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)(臺(tái)盼藍(lán)染色)

由于臺(tái)盼藍(lán)染色可以用來(lái)定性研究壞死細(xì)胞的數(shù)量,因此,可以利用接種部位染色面積的大小和顏色定性比較病斑的大小。由圖3可知,在接種24h后,瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因部位的死亡細(xì)胞數(shù)量與瞬時(shí)表達(dá)空載體的對(duì)照沒(méi)有明顯的差異,然而在接種48h后,對(duì)照部位藍(lán)色的面積以及深度都要大于瞬時(shí)表....

圖4瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因后定量和定性檢測(cè)接種部位H2O2的積累量

過(guò)氧化氫的大量積累往往被認(rèn)為是標(biāo)定植物抗病水平的一個(gè)重要指標(biāo),因此,過(guò)氧化氫濃度的定量測(cè)定能夠客觀的反映接種部位的抗性水平。為了明確瞬時(shí)表達(dá)StBAG3基因后導(dǎo)致的病斑變化原因是否為過(guò)氧化氫積累水平,對(duì)瞬時(shí)表達(dá)目的基因和空載體后馬鈴薯離體葉片進(jìn)行晚疫病菌接種,對(duì)接種后不同時(shí)間點(diǎn)的....

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