RNA沉默是真核生物抵御病毒和外來核酸入侵的保守防御機(jī)制,在植物抗病反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。目前,植物RNA沉默的基本過程已被闡明,但RNA沉默是否受植物信號(hào)分子的調(diào)控及調(diào)控機(jī)制尚不清楚。水楊酸作為一種抗病相關(guān)信號(hào)分子,能增強(qiáng)植物的抗病性,促使植物體產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性。研究表明,外施水楊酸上調(diào)RNA沉默相關(guān)基因的表達(dá),提高植物病毒抗性;而不能積累水楊酸的NahG轉(zhuǎn)基因煙草病毒siRNA積累減少,抗性降低。這說明,水楊酸介導(dǎo)的植物防御反應(yīng)與RNA沉默機(jī)制之間存在密切聯(lián)系。因此,深入研究水楊酸對(duì)RNA沉默的影響,有利于揭示RNA沉默受信號(hào)分子調(diào)控的機(jī)制,為植物病毒病防治及抗病育種提供理論依據(jù)。本研究利用瞬時(shí)表達(dá)體系結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析篩選受水楊酸誘導(dǎo)的RNA沉默相關(guān)基因,并通過瞬時(shí)超表達(dá)及RNAi對(duì)目標(biāo)基因NbPR-R進(jìn)行功能驗(yàn)證,初步證明NbPR-R可能通過下調(diào)NbCAT的表達(dá)促進(jìn)過氧化氫的積累,從而發(fā)揮增強(qiáng)RNA沉默的作用。主要結(jié)果如下:(1)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析篩選受水楊酸誘導(dǎo)的RNA沉默相關(guān)基因。本生煙葉片在2mM水楊酸噴施1天后瞬時(shí)侵染包含35S-GFP的農(nóng)桿菌,長(zhǎng)波紫外燈下觀察GFP熒光。發(fā)...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 RNA沉默的研究進(jìn)展
        1.1.1 RNA沉默的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 RNA沉默途徑
            1.1.2.1 內(nèi)源sRNA生成途徑
            1.1.2.2 外源sRNA生成途徑
        1.1.3 參與RNA沉默的細(xì)胞組分
            1.1.3.1 RNA依賴的RNA聚合酶
            1.1.3.2 Dicer蛋白
            1.1.3.3 Argonaute蛋白
        1.1.4 RNA沉默受植物激素水楊酸影響
    1.2 水楊酸的研究進(jìn)展
        1.2.1 水楊酸的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 水楊酸的合成途徑
        1.2.3 水楊酸增強(qiáng)植物抗病性
        1.2.4 NPR1是水楊酸信號(hào)中心分子
        1.2.5 水楊酸與活性氧的關(guān)系
            1.2.5.1 氧化迸發(fā)介導(dǎo)的水楊酸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
            1.2.5.2 水楊酸調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)
    1.3 活性氧的研究進(jìn)展
        1.3.1 活性氧的產(chǎn)生
        1.3.2 活性氧的清除機(jī)制
        1.3.3 活性氧在植物抗病反應(yīng)中的作用
    1.4 類甜蛋白的研究進(jìn)展
        1.4.1 類甜蛋白的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 類甜蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.4.3 類甜蛋白的功能
        1.4.4 類甜蛋白的表達(dá)模式
    1.5 立題依據(jù)與研究意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與質(zhì)粒
        2.1.3 酶和各種生化試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 工具軟件與數(shù)據(jù)庫(kù)
        2.1.6 PCR引物
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 本生煙的種植與管理
        2.2.2 基因克隆及載體構(gòu)建
        2.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化本生煙
        2.2.4 組織化學(xué)染色
        2.2.5 Northernblot檢測(cè)
        2.2.6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)侵染
3 結(jié)果與分析
    3.1 水楊酸增強(qiáng)瞬時(shí)侵染介導(dǎo)的RNA沉默
    3.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析篩選水楊酸誘導(dǎo)的沉默增強(qiáng)基因
    3.3 NbPR-R是類甜蛋白家族成員
    3.4 NbPR-R增強(qiáng)瞬時(shí)侵染介導(dǎo)的RNA沉默
    3.5 NbPR-R抑制NbCAT表達(dá)促進(jìn)過氧化氫積累
    3.6 過氧化氫增強(qiáng)瞬時(shí)侵染介導(dǎo)的RNA沉默
    3.7 穩(wěn)定表達(dá)體系中NbPR-R功能驗(yàn)證
        3.7.1 轉(zhuǎn)基因本生煙NbPR-R及NbPR-Ri株系的獲得
        3.7.2 轉(zhuǎn)基因本生煙沉默途徑相關(guān)基因表達(dá)水平檢測(cè)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文及成果
致謝



本文編號(hào)：3958811