RNA沉默是真核生物抵御病毒和外來核酸入侵的保守防御機制,在植物抗病反應中發(fā)揮重要作用。目前,植物RNA沉默的基本過程已被闡明,但RNA沉默是否受植物信號分子的調控及調控機制尚不清楚。水楊酸作為一種抗病相關信號分子,能增強植物的抗病性,促使植物體產生系統(tǒng)獲得抗性。研究表明,外施水楊酸上調RNA沉默相關基因的表達,提高植物病毒抗性;而不能積累水楊酸的NahG轉基因煙草病毒siRNA積累減少,抗性降低。這說明,水楊酸介導的植物防御反應與RNA沉默機制之間存在密切聯(lián)系。因此,深入研究水楊酸對RNA沉默的影響,有利于揭示RNA沉默受信號分子調控的機制,為植物病毒病防治及抗病育種提供理論依據。本研究利用瞬時表達體系結合轉錄組測序分析篩選受水楊酸誘導的RNA沉默相關基因,并通過瞬時超表達及RNAi對目標基因NbPR-R進行功能驗證,初步證明NbPR-R可能通過下調NbCAT的表達促進過氧化氫的積累,從而發(fā)揮增強RNA沉默的作用。主要結果如下:(1)轉錄組測序分析篩選受水楊酸誘導的RNA沉默相關基因。本生煙葉片在2mM水楊酸噴施1天后瞬時侵染包含35S-GFP的農桿菌,長波紫外燈下觀察GFP熒光。發(fā)...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 RNA沉默的研究進展
        1.1.1 RNA沉默的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 RNA沉默途徑
            1.1.2.1 內源sRNA生成途徑
            1.1.2.2 外源sRNA生成途徑
        1.1.3 參與RNA沉默的細胞組分
            1.1.3.1 RNA依賴的RNA聚合酶
            1.1.3.2 Dicer蛋白
            1.1.3.3 Argonaute蛋白
        1.1.4 RNA沉默受植物激素水楊酸影響
    1.2 水楊酸的研究進展
        1.2.1 水楊酸的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 水楊酸的合成途徑
        1.2.3 水楊酸增強植物抗病性
        1.2.4 NPR1是水楊酸信號中心分子
        1.2.5 水楊酸與活性氧的關系
            1.2.5.1 氧化迸發(fā)介導的水楊酸信號轉導
            1.2.5.2 水楊酸調節(jié)細胞內氧化還原狀態(tài)
    1.3 活性氧的研究進展
        1.3.1 活性氧的產生
        1.3.2 活性氧的清除機制
        1.3.3 活性氧在植物抗病反應中的作用
    1.4 類甜蛋白的研究進展
        1.4.1 類甜蛋白的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 類甜蛋白的結構
        1.4.3 類甜蛋白的功能
        1.4.4 類甜蛋白的表達模式
    1.5 立題依據與研究意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與質粒
        2.1.3 酶和各種生化試劑
        2.1.4 主要儀器設備
        2.1.5 工具軟件與數(shù)據庫
        2.1.6 PCR引物
    2.2 試驗方法
        2.2.1 本生煙的種植與管理
        2.2.2 基因克隆及載體構建
        2.2.3 農桿菌介導的葉盤法轉化本生煙
        2.2.4 組織化學染色
        2.2.5 Northernblot檢測
        2.2.6 農桿菌介導的瞬時侵染
3 結果與分析
    3.1 水楊酸增強瞬時侵染介導的RNA沉默
    3.2 轉錄組測序分析篩選水楊酸誘導的沉默增強基因
    3.3 NbPR-R是類甜蛋白家族成員
    3.4 NbPR-R增強瞬時侵染介導的RNA沉默
    3.5 NbPR-R抑制NbCAT表達促進過氧化氫積累
    3.6 過氧化氫增強瞬時侵染介導的RNA沉默
    3.7 穩(wěn)定表達體系中NbPR-R功能驗證
        3.7.1 轉基因本生煙NbPR-R及NbPR-Ri株系的獲得
        3.7.2 轉基因本生煙沉默途徑相關基因表達水平檢測
4 討論
5 結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的論文及成果
致謝



本文編號：3958811