發(fā)布時間：2024-04-09 03:43

　　為了研究甜菜BvMTP11基因(LOC104886952)在重金屬Cd逆境脅迫過程中的分子功能,明確其在細胞重金屬解毒中的作用,本研究將BvMTP11基因構建于E.coli原核表達載體pEASY-Blunt E1上,并將該重組質粒轉化到大腸桿菌BL21中。SDS-PAGE電泳表明,通過1 mmol·L^-1 IPTG的誘導,在大腸桿菌總蛋白46 kDa左右的位置上,獲得了重組菌表達的his tag-BvMTP11的融合蛋白。當施加0.5 mmol·L^-1的CdCl₂重金屬逆境脅迫后,對照菌的生長受到了較為嚴重的抑制。相反,過量表達BvMTP11蛋白的重組菌表現(xiàn)出了較好的生長狀態(tài),并且其體內(nèi)的鎘離子含量也要遠低于對照菌。這說明,甜菜BvMTP11基因可以在一定程度上提高E.coli對Cd²⁺的耐受性,并有可能通過對Cd²⁺的轉運和富集來解毒重金屬對細胞的傷害。研究結果也進一步說明了甜菜BvMTP11在鎘逆境脅迫分子機制中發(fā)揮著重要作用。

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【部分圖文】：

圖1甜菜BvMTP11基因的PCR擴增

2結果與分析2.1pEASY-BluntE1-BvMTP11大腸桿菌原核表達載體的構建

圖2pEASY-BluntE1-BvMTP11表達載體的鑒定

將PCR產(chǎn)物連接到pEASY-BluntE1Expressionvector上,并轉化到Trans1-T1中。挑取Amp陽性克隆培養(yǎng)并進行質粒提取,通過載體上的XbaI位點和目的基因終止子后的XhoI位點進行限制性內(nèi)切酶酶切鑒定,分別在5610bp和1350bp左右....

圖4大腸桿菌在重金屬鎘逆境下的耐受性分析

2.3鎘逆境脅迫下過量表達BvMTP11的大腸桿菌的耐受性分析為了分析甜菜BvMTP11基因在鎘逆境下的作用機制,分析了過量表達BvMTP11蛋白的大腸桿菌在重金屬鎘逆境下的生長情況。將濃度為OD600=0.5的兩組待測菌株原液分別稀釋10、100、1000和10000倍....

圖3SDS-PAGE分析Histag-BvMTP11融合蛋白的誘導表達:(a)pEASY-BluntE1(對照);(b)pEASY-BluntE1-BvMTP11

分別將pEASY-BluntE1對照空載體和重組質粒pEASY-BluntE1-BvMTP11轉化到大腸桿菌表達菌株BL21中。加入1mmol·L-1的IPTG于OD600=0.5的菌液中,進行時間梯度誘導融合蛋白表達,結果如圖3所示。圖3(a)的SDS-PAGE電泳結....

本文編號：3949263