發(fā)布時(shí)間：2024-04-06 17:42

　　為篩選鳥(niǎo)分枝桿菌中耐受表面活性物質(zhì)的基因并探究其相關(guān)功能,以認(rèn)識(shí)鳥(niǎo)分枝桿菌適應(yīng)肺部環(huán)境的殺(抑)菌機(jī)制,本研究構(gòu)建鳥(niǎo)分枝桿菌基因組文庫(kù),采用生物活性水平篩選策略從基因組文庫(kù)中篩選耐受十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate, SDS)的克隆子,運(yùn)用生物信息學(xué)分析該克隆子完整的開(kāi)放閱讀框及其編碼蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。將克隆子的全基因序列與pGEX-4T-3表達(dá)質(zhì)粒連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌,構(gòu)建過(guò)表達(dá)目的蛋白的重組菌。檢測(cè)重組菌分別在含SDS、H₂O₂、NaNO₂和GSNO條件環(huán)境下的存活率。結(jié)果表明成功構(gòu)建滴度為1.18×10⁴ cfu/mL的鳥(niǎo)分枝桿菌基因組文庫(kù),從文庫(kù)中篩選到一個(gè)耐受SDS的基因MAV-4292。生物信息學(xué)分析顯示,MAV-4292蛋白是一個(gè)無(wú)信號(hào)肽的跨膜蛋白,二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主。過(guò)表達(dá)MAV-4292重組菌在2%SDS、5 mmol/L H₂O₂、20 mmol/L NaNO₂和10 mmol/L ...

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

圖1基因組文庫(kù)克隆子的PCR鑒定

將基因與pGEX-4T-3載體連接后轉(zhuǎn)化E.coliDH5α，挑單菌落培養(yǎng)后提取重組質(zhì)粒。MAV-4292重組質(zhì)粒經(jīng)BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切得到大小約為4959bp和450bp的2條區(qū)帶(圖4A)，表明成功構(gòu)建了pGEX-MAV-4292重組表達(dá)質(zhì)粒。將pGEX-....

圖2MAV-4292基因及其編碼氨基酸序列

圖1基因組文庫(kù)克隆子的PCR鑒定圖3MAV-4292基因序列比對(duì)

圖3MAV-4292基因序列比對(duì)

圖2MAV-4292基因及其編碼氨基酸序列1.5過(guò)表達(dá)MAV-4292重組菌對(duì)SDS、H2O2、NaNO2和GSNO耐受能力的檢測(cè)

圖4pGEX-4292基因的克隆及在大腸桿菌中的過(guò)表達(dá)

鳥(niǎo)分枝桿菌屬于機(jī)會(huì)致病菌，主要引起肺部組織的病變。當(dāng)人體在缺乏正常T細(xì)胞免疫時(shí)，可受到嚴(yán)重感染。在晚期艾滋病患者中，約70%合并感染鳥(niǎo)分枝桿菌。鳥(niǎo)分枝桿菌與很多致病性分枝桿菌一樣，屬于胞內(nèi)寄生菌，能夠存活于宿主細(xì)胞并進(jìn)行繁殖(Danelishvilietal.,2007;St....

本文編號(hào)：3946965