為篩選鳥分枝桿菌中耐受表面活性物質(zhì)的基因并探究其相關(guān)功能,以認識鳥分枝桿菌適應(yīng)肺部環(huán)境的殺(抑)菌機制,本研究構(gòu)建鳥分枝桿菌基因組文庫,采用生物活性水平篩選策略從基因組文庫中篩選耐受十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate, SDS)的克隆子,運用生物信息學(xué)分析該克隆子完整的開放閱讀框及其編碼蛋白的二級結(jié)構(gòu)特點。將克隆子的全基因序列與pGEX-4T-3表達質(zhì)粒連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌,構(gòu)建過表達目的蛋白的重組菌。檢測重組菌分別在含SDS、H₂O₂、NaNO₂和GSNO條件環(huán)境下的存活率。結(jié)果表明成功構(gòu)建滴度為1.18×10⁴ cfu/mL的鳥分枝桿菌基因組文庫,從文庫中篩選到一個耐受SDS的基因MAV-4292。生物信息學(xué)分析顯示,MAV-4292蛋白是一個無信號肽的跨膜蛋白,二級結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主。過表達MAV-4292重組菌在2%SDS、5 mmol/L H₂O₂、20 mmol/L NaNO₂和10 mmol/L ...

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圖1基因組文庫克隆子的PCR鑒定

將基因與pGEX-4T-3載體連接后轉(zhuǎn)化E.coliDH5α，挑單菌落培養(yǎng)后提取重組質(zhì)粒。MAV-4292重組質(zhì)粒經(jīng)BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切得到大小約為4959bp和450bp的2條區(qū)帶(圖4A)，表明成功構(gòu)建了pGEX-MAV-4292重組表達質(zhì)粒。將pGEX-....

圖2MAV-4292基因及其編碼氨基酸序列

圖1基因組文庫克隆子的PCR鑒定圖3MAV-4292基因序列比對

圖3MAV-4292基因序列比對

圖2MAV-4292基因及其編碼氨基酸序列1.5過表達MAV-4292重組菌對SDS、H2O2、NaNO2和GSNO耐受能力的檢測

圖4pGEX-4292基因的克隆及在大腸桿菌中的過表達

鳥分枝桿菌屬于機會致病菌，主要引起肺部組織的病變。當人體在缺乏正常T細胞免疫時，可受到嚴重感染。在晚期艾滋病患者中，約70%合并感染鳥分枝桿菌。鳥分枝桿菌與很多致病性分枝桿菌一樣，屬于胞內(nèi)寄生菌，能夠存活于宿主細胞并進行繁殖(Danelishvilietal.,2007;St....

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