為提高來源于擬南芥的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SAM1)在大腸埃希菌中的可溶性表達水平,采用無縫克隆的方法分別將谷胱甘肽巰基轉移酶、TrxA蛋白、小分子泛素樣修飾物(SUMO)蛋白、MsyB蛋白、泛素類蛋白這5種不同的融合標簽與SAM1進行了N端融合表達。結果表明,SUMO蛋白作為融合標簽時,SAM1表達菌株的可溶性蛋白表達量顯著高于無融合標簽的SAM1表達菌株,其細胞內可溶性蛋白總量達到401.19 mg/L。此外,對融合了SUMO蛋白標簽的SAM1菌株和原始菌株進行菌體轉化研究。結果表明,在菌體量相同的條件下,SUMO蛋白作為融合標簽的SAM1表達菌株對底物的轉化率為69.80%,相比原始菌株提高了40.51%。因此,選擇SUMO蛋白作為融合標簽能顯著提高SAM1在大腸埃希菌中的可溶表達水平,為下一步對S-腺苷甲硫氨酸合成酶進行工業(yè)化應用提供參考。

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【部分圖文】：

圖2SAM1表達載體構建電泳圖

電泳結果如圖2所示,SAM1的各個原核重組表達載體構建已經完成,目的片段電泳檢測條帶大小與預期一致。2.4SAM1各表達菌株的可溶性蛋白含量檢測及酶活性分析

圖1SAM的酶合成法

ProminenceLC-20A型高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)；DYY-6C型電泳儀(北京市六一儀器廠)；96-WellThermalCyclerPCR儀(美國ThermoFisher公司)；SM-150A型超聲破碎儀(南京舜瑪儀器設備有限公司)。蛋白純化....

圖3SAM1活性HPLC色譜圖

采用“2.4”項下發(fā)酵方法,收集各個表達菌株的菌體,用適量無菌水重懸后超聲處理(菌體量一致),超聲破碎后分別取破碎上清液、菌渣沉淀進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分析。結果如圖4所示,沒有添加融合標簽(帶有His標簽)的SAMS相對分子質量約為50000,與預期大小一....

圖4SAM1及其不同融合蛋白的SDS-PAGE分析

表1各個表達菌株的可溶性蛋白及SAM1酶活檢測(x__±s,n=3)Tab.1SolubleProteinandSAM1EnzymeActivityAssayofEachExpressionStrain(x__±s,n=3)菌株名稱可溶性蛋白含量/....

本文編號：3917320