利用qRT-PCR方法,檢測大豆液泡加工酶VPE基因在鹽、干旱、低溫、ABA條件下及大豆不同組織中的表達情況,結(jié)果顯示VPE基因在鹽、干旱、低溫和ABA處理不同時間下,VPE基因的表達趨勢基本相同,都是先隨處理時間增加表達量升高,只是在鹽處理中,最高表達量出現(xiàn)在5 h時,其它處理最高表達量出現(xiàn)在2 h,之后基因表達都下降。四種處理條件下,基因的表達變化不大,說明VPE基因基本不受鹽、干旱、低溫和ABA誘導(dǎo)。VPE基因在種子中的表達相對較高,尤其在90 DAF的種子中,相對于根的表達量為212.22倍。以大豆基因組DNA為模板,克隆VPE基因5’端上游啟動子序列1 914 bp,生物信息學(xué)預(yù)測表明VPE基因啟動子中存在多種與種子特異表達相關(guān)的順式調(diào)控元件,推測該啟動子可能具有調(diào)控下游基因在種子中高表達的特性。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖4pMD18-T-VP的雙酶切鑒定

圖3VP的PCR擴增產(chǎn)物同樣，本研究也進一步檢測VPE基因在大豆各組織中的表達方式(圖2)，不僅是在根、莖、葉、花中，也檢測了不同發(fā)育時期的種子，發(fā)現(xiàn)VPE基因具有較好的組織特異性，即在大豆種子中的表達量最高，在根、莖、葉、花中表達都較低；此外，不同發(fā)育時期的種子中，以該基因的....

圖5VP啟動子序列

將鹽脅迫、干旱脅迫、低溫脅迫和ABA處理的各類大豆幼苗，在不同處理時間點，均稱取3g葉片，分為3份，每份1g作為1次生物學(xué)重復(fù)。液氮研磨后，采用RNA提取試劑(TRIzolreagent)提取大豆總RNA，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，用于進行qRT-PCR反應(yīng)。選用大豆持家基因β-....

圖1大豆VPE基因在鹽(A),干旱(B),低溫(C)和脫落酸(D)條件下的表達

根據(jù)大豆基因組中VPE基因序列，設(shè)計引物，PCR擴增VPE基因上游的啟動子序列，擴增片段長度為1914bp，命名為VP(圖3)。將VP片段連接到pMD18-T載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)，獲得重組質(zhì)粒pMD18-T-VP。采用PstⅠ與KpnⅠ限制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定后....

圖2大豆VPE基因在大豆各組織中的表達

圖1大豆VPE基因在鹽(A),干旱(B),低溫(C)和脫落酸(D)條件下的表達1.4大豆VP啟動子的生物信息學(xué)分析

本文編號：3913227