棕色脂肪組織(brown adipose tissue,BAT)利用脂肪酸作為代謝底物,通過β氧化和解偶聯(lián)蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)的去耦作用在線粒體中產(chǎn)生熱量,燃燒脂肪。目前,關(guān)于BAT研究主要集中于人和小型哺乳動(dòng)物,而在較大的動(dòng)物身上鮮有報(bào)道。長期在高原環(huán)境下生活的牦牛擁有耐寒的獨(dú)特體質(zhì),使牦牛成為探究動(dòng)物機(jī)體對寒冷環(huán)境適應(yīng)性機(jī)制最佳的研究對象。因此,本試驗(yàn)針對不同季節(jié)牦牛機(jī)體棕色脂肪組織相關(guān)基因差異表達(dá)和其脂肪酸成分是否有關(guān)聯(lián),隨機(jī)選取冷季(一月)和暖季(十月)的放牧成年牦牛脊椎、肩胛、皮下、腎臟周圍、腹部五個(gè)脂肪組織作為試驗(yàn)材料,開展免疫組化、Western blotting、Real-time PCR、RNA-Seq技術(shù)以及測定脂肪酸成分一系列的研究,從分子角度揭示牦牛機(jī)體棕色脂肪,并為牦牛在寒冷環(huán)境下生存的機(jī)理提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。研究結(jié)果如下:(1)UCP1蛋白表達(dá)和基因相對表達(dá)量:利用免疫組化和Western blotting檢測得到UCP1蛋白在不同季節(jié)牦牛五個(gè)脂肪組織中均有表達(dá),且在皮下脂肪、肩胛、腎臟脂肪組織中表達(dá)較高,差異顯著(P<...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 綜述
    1.1 牦牛簡介
        1.1.1 不同季節(jié)放牧牦牛生長特點(diǎn)
        1.1.2 低溫環(huán)境下牦牛機(jī)體生存機(jī)制
        1.1.3 牦牛機(jī)體脂肪酸研究進(jìn)展
    1.2 棕色脂肪組織
        1.2.1 寒冷刺激下BAT的產(chǎn)熱機(jī)制
        1.2.2 棕色脂肪組織的分布
        1.2.3 UCP1 基因研究進(jìn)展
    1.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)
        1.3.1 RNA-Seq技術(shù)
        1.3.2 RNA-Seq技術(shù)原理
        1.3.3 RNA-Seq應(yīng)用
    1.4 研究意義
第二章 不同季節(jié)牦牛棕色脂肪組織UCP1 蛋白表達(dá)分析
    2.1 前言
    2.2 試驗(yàn)材料、儀器
        2.2.1 試驗(yàn)材料
        2.2.2 試驗(yàn)試劑
        2.2.3 試驗(yàn)儀器
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 HE染色
        2.3.2 免疫組化
        2.3.3 Western blotting
    2.4 結(jié)果和分析
        2.4.1 HE染色結(jié)果
        2.4.2 免疫組化結(jié)果
        2.4.3 牦牛棕色脂肪組織相關(guān)蛋白表達(dá)
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 不同季節(jié)牦牛棕色脂肪組織中UCP1 基因相對表達(dá)量分析
    3.1 前言
    3.2 試驗(yàn)材料、儀器
        3.2.1 試驗(yàn)材料采集
        3.2.2 試驗(yàn)試劑
        3.2.3 試驗(yàn)儀器
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 牦牛脂肪組織Total RNA提取
        3.3.2 Total RNA的濃度和純度檢測
        3.3.3 Real-time PCR
        3.3.4 數(shù)據(jù)處理
    3.4 結(jié)果分析
        3.4.1 RNA電泳及完整性檢測
        3.4.2 PCR擴(kuò)增電泳圖
        3.4.3 不同季節(jié)牦牛脂肪組織UCP1 基因熒光定量
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 牦牛脊椎脂肪組織RNA-Seq分析
    4.1 前言
    4.2 試驗(yàn)材料、儀器
        4.2.1 試驗(yàn)材料
        4.2.2 試驗(yàn)試劑
        4.2.3 試驗(yàn)儀器
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 牦牛脂肪組織Total RNA提取
        4.3.2 Total RNA的 RIN值測定
        4.3.3 文庫構(gòu)建與質(zhì)檢、上機(jī)測序
        4.3.4 信息分析流程
        4.3.5 Real-time PCR試驗(yàn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組學(xué)
    4.4 RNA-Seq數(shù)據(jù)質(zhì)檢結(jié)果
        4.4.1 RNA電泳及完整性檢測
        4.4.2 數(shù)據(jù)質(zhì)控
            4.4.2.1 測序數(shù)據(jù)的過濾錯(cuò)誤率的分布
            4.4.2.2 錯(cuò)誤率的分布
        4.4.3 數(shù)據(jù)質(zhì)量匯總
        4.4.4 比對率統(tǒng)計(jì)
        4.4.5 比對區(qū)域分布
        4.4.6 基因定量分析
        4.4.7 樣品間相關(guān)性
    4.5 差異基因表達(dá)結(jié)果
        4.5.1 不同季節(jié)牦牛脊椎脂肪組織差異基因表達(dá)分析
        4.5.2 育肥牦牛脊椎脂肪組織差異基因表達(dá)分析
        4.5.3 差異基因聚類分析
        4.5.4 Real-time PCR驗(yàn)證差異基因表達(dá)
            4.5.4.1 Real-time PCR驗(yàn)證不同季節(jié)樣品差異基因表達(dá)
            4.5.4.2 Real-time PCR驗(yàn)證育肥樣品差異基因表達(dá)
    4.6 富集結(jié)果
        4.6.1 不同季節(jié)牦牛脊椎脂肪組織基因富集分析
        4.6.2 育肥牦牛脊椎脂肪組織基因富集分析
    4.7 討論
    4.8 本章小結(jié)
第五章 不同季節(jié)牦牛脂肪組織脂肪酸成分的比較
    5.1 前言
    5.2 試驗(yàn)材料、儀器
        5.2.1 試驗(yàn)材料采集
        5.2.2 試驗(yàn)試劑
        5.2.3 試驗(yàn)儀器
    5.3 試驗(yàn)方法
        5.3.1 牦牛脂肪組織甲脂化
        5.3.2 氣相色譜質(zhì)譜
        5.3.3 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結(jié)果分析
        5.4.1 不同季節(jié)牦牛脂肪組織脂肪酸含量測定
        5.4.2 不同季節(jié)牦牛脂肪組織脂肪酸含量和UCP1 基因相對表達(dá)量關(guān)系
    5.5 討論
    5.6 本章小結(jié)
結(jié)論
    1 不同季節(jié)牦牛棕色脂肪組織中UCP1 蛋白表達(dá)
    2 不同季節(jié)牦牛棕色脂肪組織中UCP1 基因相對表達(dá)量
    3 RNA-Seq分析牦牛脊椎脂肪組織
    4 不同季節(jié)牦牛脂肪組織脂肪酸含量的比較
展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號：3901793