目的獲取青海高原地區(qū)結(jié)核病患者對結(jié)核治療藥物的耐藥性,了解患者基本情況與耐藥性的關(guān)系;對本地區(qū)結(jié)核菌株進行大片段多態(tài)性序列(large sequence polymorphisms,LSP;或稱差異片段Regions of difference,RD)基因分型,并分析菌株耐藥性與基因型是否相關(guān);研究菌株磷脂酶C編碼基因(phospholipase C,plc)的多態(tài)性及其與耐藥水平的關(guān)系;同時探索RD和plc這兩種大片段基因多態(tài)性之間是否存在聯(lián)系。方法(1)收集青海地區(qū)可疑結(jié)核病患者痰樣,經(jīng)培養(yǎng)和鑒定后,刮取部分結(jié)核桿菌菌落,采用比例法藥敏試驗,檢測菌株對常用結(jié)核治療藥物的耐藥性。(2)煮沸法提集菌株樣本DNA后,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴增結(jié)核菌基因組RD基因,對菌株進行RD基因分型。隨機挑選部分菌株,對利福平、異煙肼熱點耐藥突變基因(rpoB、katG)進行測序,隨后分析菌株比例法耐藥結(jié)果及熱點耐藥基因(rpoB、katG)突變與RD基因型之間是否有關(guān)。(3)通過PCR檢測結(jié)核桿菌的磷脂酶C編碼基因,獲得該基因的多態(tài)性特點。探索plc基因與菌株RD基因型、plc基因突變率與結(jié)核桿菌...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要符號對照表
第1章 引言
第2章 菌株的培養(yǎng)鑒定及藥敏結(jié)果分析
    2.1 研究對象
    2.2 所需器材和主要試劑
    2.3 菌株羅氏培養(yǎng)及鑒定
        2.3.1 改良羅氏培養(yǎng)基的制備方法
        2.3.2 標(biāo)本前處理
        2.3.3 標(biāo)本接種
        2.3.4 結(jié)核分枝桿菌的鑒定
    2.4 質(zhì)量控制
    2.5 藥敏培養(yǎng)基的制備及藥敏試驗
        2.5.1 藥敏培養(yǎng)基的制備
        2.5.2 比例法藥敏試驗的接種和培養(yǎng)步驟
    2.6 菌株來源及比例法藥敏結(jié)果
        2.6.1 菌株來源
        2.6.2 一線藥物的藥敏結(jié)果
        2.6.3 二線藥物藥敏結(jié)果
    2.7 討論
第3章 結(jié)核桿菌RD基因分型
    3.1 研究對象
    3.2 主要儀器和試劑
    3.3 菌株DNA的提取
    3.4 RD基因分型實驗操作過程
        3.4.1預(yù)實驗
        3.4.2樣本正式實驗
        3.4.3 瓊脂糖凝膠電泳及成像
    3.5 質(zhì)量控制
    3.6 結(jié)核分枝桿菌RD基因分型結(jié)果
        3.6.1 本地區(qū)RD分型結(jié)果及與其他地區(qū)結(jié)果比較
        3.6.2 菌株RD分型與人口學(xué)特征聯(lián)系
        3.6.3 RD分型與菌株耐藥表型的聯(lián)系
        3.6.4 RD分型與熱點耐藥基因突變的關(guān)系
    3.7 討論
第4章 結(jié)核桿菌的磷脂酶C基因多態(tài)性
    4.1 研究對象
    4.2 主要儀器和試劑
    4.3 檢測plc基因?qū)嶒灢僮鬟^程
        4.3.1預(yù)實驗
        4.3.2樣本正式實驗
        4.3.3 瓊脂糖凝膠電泳及成像
    4.4 結(jié)核分枝桿菌plc基因多態(tài)性結(jié)果
        4.4.1 plc基因擴增結(jié)果
        4.4.2 plc基因型與菌株表型耐藥的結(jié)果分析
        4.4.3 菌株基因型與plc基因突變的關(guān)系
    4.5 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻
綜述 結(jié)核分枝桿菌的主要基因分型方法概述
    參考文獻
致謝
作者在讀期間科研成果簡介



本文編號：3883294