背景與目的:膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因同源物2 (glioma-associated oncogene homolog 2,Gli2)是Hedgehog信號通路重要的轉(zhuǎn)錄因子,它不僅與正常細胞的生長密切相關(guān),而且在多種腫瘤細胞中異常激活。探討Gli2對結(jié)腸癌細胞系SW620增殖和凋亡的影響及其可能機制。方法:以Gli2干擾慢病毒載體感染SW620細胞,實驗設(shè)干擾組、空病毒載體組和對照組,采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[質(zhì)]印跡法(Western blot)檢測細胞中Gli2 mRNA表達和蛋白水平,采用細胞計數(shù)試劑盒-8 (cell counting kit-8,CCK-8)、集落形成實驗和倍增時間檢測細胞的增殖情況,流式細胞術(shù)(flow cytometry)檢測各組細胞周期和凋亡情況,Western blot法檢測細胞中ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和cyclin D1蛋白水平。結(jié)果:SW620細胞轉(zhuǎn)染慢病毒載體72 h后,可見...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料和細胞系
    1.2 試驗方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 分組及慢病毒載體感染
        1.2.3 RTFQ-PCR檢測細胞m RNA表達
        1.2.4 Western blot檢測細胞Gli2、ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和cyclin D1蛋白水平
        1.2.5 細胞計數(shù)試劑盒-8(cell counting kit-8,CCK-8）測定細胞增殖活性
        1.2.6 計算細胞倍增時間
        1.2.7 集落形成實驗檢測各組細胞集落形成率
        1.2.8 流式細胞術(shù)（flow cytometry）檢測細胞周期和凋亡率
    1.3 統(tǒng)計學處理
2 結(jié)果
    2.1 重組慢病毒載體感染效果鑒定
    2.2 沉默Gli2基因能顯著抑制SW620細胞的增殖
    2.3 沉默Gli2基因能明顯阻滯SW620細胞周期的進展
    2.4 沉默Gli2基因能明顯增加SW620細胞的凋亡率
    2.5 Western blot檢測各組細胞ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和cyclin D1蛋白的水平
3 討論



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