表觀遺傳學(xué)是在基因DNA序列不發(fā)生改變的情況下,研究可遺傳的基因表達(dá)的一門(mén)學(xué)科。所研究對(duì)象是染色質(zhì)的DNA和組蛋白化學(xué)修飾,例如組蛋白乙�；�、DNA甲基化等。它們相互作用維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,控制細(xì)胞表型;其修飾異常會(huì)導(dǎo)致腫瘤和自身免疫性疾病等各種疾患的發(fā)生。BRD4含有兩個(gè)溴結(jié)構(gòu)域和一個(gè)超末端結(jié)構(gòu),是表觀遺傳修飾的閱讀蛋白質(zhì)。在整個(gè)細(xì)胞周期中,其溴結(jié)構(gòu)域識(shí)別乙�；慕M蛋白,在高乙�；娃D(zhuǎn)錄活躍的染色質(zhì)區(qū)域聚集(包括啟動(dòng)子和增強(qiáng)子)招募不同的轉(zhuǎn)錄因子,如介導(dǎo)蛋白Mediator和P-TEFb形成蛋白質(zhì)復(fù)合物組裝的成核中心,促進(jìn)RNA Pol II的活性,刺激基因轉(zhuǎn)錄的起始和延伸,從而調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。BRD4的表達(dá)異常與急性髓細(xì)胞性白血病、黑色素瘤、伯基特淋巴瘤、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、NUT中線癌和乳腺癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān);通過(guò)小分子靶向抑制BRD4,能誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡及增殖減緩,從而達(dá)到抗腫瘤的作用,因此,BRD4作為抗癌藥物研發(fā)的重要靶標(biāo)被廣泛認(rèn)可。但其具體的作用機(jī)制我們?nèi)匀徊磺宄�。在�?xì)胞中存在許多無(wú)膜的細(xì)胞器樣結(jié)構(gòu),這些結(jié)構(gòu)包含蛋白質(zhì),核酸等生物功能分子,能夠在局部...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
第1章 緒論
    1.1 表觀遺傳與腫瘤
    1.2 溴結(jié)構(gòu)域
        1.2.1 溴結(jié)構(gòu)域蛋白的結(jié)構(gòu)和分類(lèi)
        1.2.2 BET蛋白家族的結(jié)構(gòu)及功能
    1.3 BRD4 蛋白的生理功能
        1.3.1 BRD4 與組蛋白
        1.3.2 BRD4 與非組蛋白
        1.3.3 BRD4 蛋白與腫瘤
    1.4 蛋白質(zhì)的液液相分離
        1.4.1 生物學(xué)功能
        1.4.2 調(diào)節(jié)細(xì)胞相分離的途徑
        1.4.3 液液相分離與疾病
    1.5 論文的研究目的和設(shè)計(jì)思路
        1.5.1 論文的研究目的
        1.5.2 論文的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        2.1.3 主要使用試劑
        2.1.4 抗體
        2.1.5 與蛋白結(jié)合的雙鏈DNA序列
        2.1.6 實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)所需的引物序列
        2.1.7 實(shí)驗(yàn)中使用的試劑盒
    2.2 溶液的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 蛋白純化
        2.3.2 生物素標(biāo)記的雙鏈DNA的合成
        2.3.3 電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)
        2.3.4 熒光偏振(FA)檢測(cè)
        2.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.6 免疫熒光鑒定
        2.3.7 蛋白質(zhì)磷酸化
        2.3.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.9 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 蛋白免疫印跡(Western Blot)實(shí)驗(yàn)
        2.3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 BRD4 蛋白的N末端能結(jié)合DNA
        3.1.1 BRD4S與 DNA結(jié)合的結(jié)果
        3.1.2 BRD4 不同片段與DNA結(jié)合的結(jié)果
        3.1.3 BET抑制劑對(duì)BRD4與DNA結(jié)合的影響
    3.2 BRD4 溴結(jié)構(gòu)域以及無(wú)序結(jié)構(gòu)區(qū)域?qū)NA親和力的影響
        3.2.1 BRD4 溴結(jié)構(gòu)域?qū)NA親和力的影響
        3.2.2 BRD4 無(wú)序結(jié)構(gòu)區(qū)域?qū)NA親和力的影響
        3.2.3 BRD4 蛋白磷酸對(duì)DNA親和力的影響
    3.3 BRD4 蛋白與DNA的結(jié)合促進(jìn)BRD4 蛋白的液態(tài)相分離以及染色質(zhì)聚集
        3.3.1 BRD4S蛋白在體外形成液滴
        3.3.2 BRD4S蛋白在細(xì)胞內(nèi)形成液滴
        3.3.3 BET抑制劑對(duì)BRD4 核斑點(diǎn)形成的影響
        3.3.4 BRD4 液相分離對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在讀期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3865287