發(fā)布時間：2023-11-18 12:28

　　表觀遺傳學(xué)是在基因DNA序列不發(fā)生改變的情況下,研究可遺傳的基因表達的一門學(xué)科。所研究對象是染色質(zhì)的DNA和組蛋白化學(xué)修飾,例如組蛋白乙酰化、DNA甲基化等。它們相互作用維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,控制細胞表型;其修飾異常會導(dǎo)致腫瘤和自身免疫性疾病等各種疾患的發(fā)生。BRD4含有兩個溴結(jié)構(gòu)域和一個超末端結(jié)構(gòu),是表觀遺傳修飾的閱讀蛋白質(zhì)。在整個細胞周期中,其溴結(jié)構(gòu)域識別乙�；慕M蛋白,在高乙酰化和轉(zhuǎn)錄活躍的染色質(zhì)區(qū)域聚集(包括啟動子和增強子)招募不同的轉(zhuǎn)錄因子,如介導(dǎo)蛋白Mediator和P-TEFb形成蛋白質(zhì)復(fù)合物組裝的成核中心,促進RNA Pol II的活性,刺激基因轉(zhuǎn)錄的起始和延伸,從而調(diào)控細胞的生長和分化。BRD4的表達異常與急性髓細胞性白血病、黑色素瘤、伯基特淋巴瘤、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、NUT中線癌和乳腺癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān);通過小分子靶向抑制BRD4,能誘發(fā)腫瘤細胞凋亡及增殖減緩,從而達到抗腫瘤的作用,因此,BRD4作為抗癌藥物研發(fā)的重要靶標被廣泛認可。但其具體的作用機制我們?nèi)匀徊磺宄Ｔ诩毎写嬖谠S多無膜的細胞器樣結(jié)構(gòu),這些結(jié)構(gòu)包含蛋白質(zhì),核酸等生物功能分子,能夠在局部...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞對照表
第1章 緒論
    1.1 表觀遺傳與腫瘤
    1.2 溴結(jié)構(gòu)域
        1.2.1 溴結(jié)構(gòu)域蛋白的結(jié)構(gòu)和分類
        1.2.2 BET蛋白家族的結(jié)構(gòu)及功能
    1.3 BRD4 蛋白的生理功能
        1.3.1 BRD4 與組蛋白
        1.3.2 BRD4 與非組蛋白
        1.3.3 BRD4 蛋白與腫瘤
    1.4 蛋白質(zhì)的液液相分離
        1.4.1 生物學(xué)功能
        1.4.2 調(diào)節(jié)細胞相分離的途徑
        1.4.3 液液相分離與疾病
    1.5 論文的研究目的和設(shè)計思路
        1.5.1 論文的研究目的
        1.5.2 論文的實驗設(shè)計
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細胞系
        2.1.2 實驗主要儀器
        2.1.3 主要使用試劑
        2.1.4 抗體
        2.1.5 與蛋白結(jié)合的雙鏈DNA序列
        2.1.6 實時聚合酶鏈式反應(yīng)(qRT-PCR)所需的引物序列
        2.1.7 實驗中使用的試劑盒
    2.2 溶液的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 蛋白純化
        2.3.2 生物素標記的雙鏈DNA的合成
        2.3.3 電泳遷移率變動分析(EMSA)
        2.3.4 熒光偏振(FA)檢測
        2.3.5 細胞培養(yǎng)
        2.3.6 免疫熒光鑒定
        2.3.7 蛋白質(zhì)磷酸化
        2.3.8 細胞轉(zhuǎn)染
        2.3.9 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qRT-PCR)實驗
        2.3.10 蛋白免疫印跡(Western Blot)實驗
        2.3.11 統(tǒng)計學(xué)方法
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 BRD4 蛋白的N末端能結(jié)合DNA
        3.1.1 BRD4S與 DNA結(jié)合的結(jié)果
        3.1.2 BRD4 不同片段與DNA結(jié)合的結(jié)果
        3.1.3 BET抑制劑對BRD4與DNA結(jié)合的影響
    3.2 BRD4 溴結(jié)構(gòu)域以及無序結(jié)構(gòu)區(qū)域?qū)NA親和力的影響
        3.2.1 BRD4 溴結(jié)構(gòu)域?qū)NA親和力的影響
        3.2.2 BRD4 無序結(jié)構(gòu)區(qū)域?qū)NA親和力的影響
        3.2.3 BRD4 蛋白磷酸對DNA親和力的影響
    3.3 BRD4 蛋白與DNA的結(jié)合促進BRD4 蛋白的液態(tài)相分離以及染色質(zhì)聚集
        3.3.1 BRD4S蛋白在體外形成液滴
        3.3.2 BRD4S蛋白在細胞內(nèi)形成液滴
        3.3.3 BET抑制劑對BRD4 核斑點形成的影響
        3.3.4 BRD4 液相分離對基因轉(zhuǎn)錄的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻
作者簡介及在讀期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3865287