雞胚在孵化階段依靠外界輸入氧氣參與機(jī)體基礎(chǔ)生命代謝以維持機(jī)體正常發(fā)育,而后期隨著加劇的胚胎生長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致活性氧的加速產(chǎn)生,其過量的積累會(huì)打破氧化應(yīng)激平衡,對(duì)機(jī)體造成干擾和損傷。此時(shí)存在于雞胚內(nèi)部的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、過氧化物酶(POD)等抗氧化酶會(huì)與之結(jié)合進(jìn)而發(fā)生分解反應(yīng),以保證發(fā)育過程中的氧化應(yīng)激平衡。有研究表明,在雞胚整個(gè)孵化過程中分散在不同部位的抗氧化酶其種類和活性是持續(xù)變化的,然而對(duì)于調(diào)控抗氧化酶活性的作用機(jī)制尚未清晰,因此挖掘調(diào)控抗氧化酶活性的關(guān)鍵基因是本研究的主要目的。本課題基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),篩選出雞胚肝臟組織中調(diào)控抗氧化功能的差異表達(dá)基因,并構(gòu)建過氧化氫誘導(dǎo)的雞胚肝細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,以期探索關(guān)鍵基因的調(diào)控機(jī)理,試驗(yàn)結(jié)果如下所示:1.抗氧化酶活性檢測(cè)結(jié)果:孵化期處于Day 12到Day 18的雞胚肝臟組織中的SOD酶活和GSH-Px酶活均呈現(xiàn)先降低后增高的趨勢(shì),且Day 12和Day 16雞胚肝臟組織的SOD酶活與GSH-Px酶活顯著差異(p<0.05),因此,將孵化至Day 12和Day 16的雞胚肝臟組織做為下一步轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)?..

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 雞胚抗氧化功能研究
        1.1.1 雞胚簡(jiǎn)介
        1.1.2 氧化應(yīng)激簡(jiǎn)介
        1.1.3 雞胚的抗氧化作用研究現(xiàn)狀
        1.1.4 調(diào)控雞胚的抗氧化作用相關(guān)基因的研究進(jìn)展
    1.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)
        1.2.2 測(cè)序技術(shù)的發(fā)展
        1.2.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在鑒定重要性狀關(guān)鍵基因上的應(yīng)用
    1.3 本課題研究目的及意義
第二章 雞胚肝臟組織抗氧化酶活性測(cè)定
    2.1 引言
    2.2 試驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 試驗(yàn)材料
        2.2.2 試驗(yàn)儀器
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 試驗(yàn)材料預(yù)處理
        2.3.2 蛋白含量檢測(cè)
        2.3.3 超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)
        2.3.4 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)檢測(cè)
    2.4 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.4.1 蛋白含量檢測(cè)
        2.4.2 超氧化物歧化酶活性檢測(cè)
        2.4.3 谷胱甘肽過氧化物酶活性檢測(cè)
    2.5 本章結(jié)論
第三章 基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)篩選調(diào)控雞胚肝臟組織抗氧化功能差異表達(dá)基因
    3.1 引言
    3.2 試驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 試驗(yàn)材料
        3.2.2 試驗(yàn)儀器
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 肝臟組織總RNA提取
        3.3.2 總RNA質(zhì)量檢測(cè)
        3.3.3 cDNA文庫(kù)構(gòu)建
        3.3.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        3.3.5 熒光定量PCR檢測(cè)
    3.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
        3.4.1 總RNA質(zhì)量檢測(cè)
        3.4.2 測(cè)序原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        3.4.3 試驗(yàn)相關(guān)性分析
        3.4.4 基因表達(dá)水平分析
        3.4.5 差異表達(dá)分析
        3.4.6 差異表達(dá)基因富集分析
    3.5 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.5.1 總RNA提取質(zhì)量檢測(cè)
        3.5.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        3.5.3 參考序列比對(duì)
        3.5.4 基因表達(dá)水平分析
        3.5.5 差異基因表達(dá)分析
        3.5.6 差異表達(dá)基因富集分析
        3.5.7 差異表達(dá)基因驗(yàn)證
        3.5.8 討論
    3.6 本章結(jié)論
第四章 維生素C緩解過氧化氫誘導(dǎo)的雞胚肝細(xì)胞氧化應(yīng)激探究
    4.1 引言
    4.2 試驗(yàn)材料及儀器
        4.2.1 試驗(yàn)材料
        4.2.2 試驗(yàn)儀器
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 培養(yǎng)板包被
        4.3.2 雞胚肝細(xì)胞分離體外培養(yǎng)
        4.3.3 過氧化氫濃度區(qū)間設(shè)定檢測(cè)
        4.3.4 試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)
        4.3.5 肝細(xì)胞存活率的檢測(cè)
        4.3.6 超氧化物歧化酶活檢測(cè)
        4.3.7 維生素C對(duì)氧化應(yīng)激的緩解作用
        4.3.8 熒光定量PCR檢測(cè)
    4.4 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.4.1 原代雞胚肝細(xì)胞體外培養(yǎng)
        4.4.2 過氧化氫濃度區(qū)間的選擇
        4.4.3 過氧化氫處理對(duì)雞胚肝細(xì)胞存活率的影響
        4.4.4 過氧化氫對(duì)肝細(xì)胞超氧化物歧化酶活性的影響
        4.4.5 維生素C的安全濃度的篩選
        4.4.6 雞胚肝細(xì)胞的活力變化檢測(cè)
        4.4.7 關(guān)鍵基因的驗(yàn)證
    4.5 本章結(jié)論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 試驗(yàn)結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動(dòng)及成果情況



本文編號(hào)：3865013