油菜種子發(fā)育與油脂的合成代謝是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)。本研究以實(shí)驗(yàn)室早期獲得的一個(gè)在油菜種子發(fā)育后期表達(dá)的功能未知基因——BnaLCR78為研究對(duì)象,利用生物信息學(xué)方法、分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等技術(shù)手段,對(duì)該基因結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行了初步研究,獲得了如下研究結(jié)果:1.通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)BnaLCR78在甘藍(lán)型油菜A組和C組中分別存在1個(gè)拷貝,BnaLCR78.A基因全長531 bp,BnaLCR78.C基因全長538 bp,兩個(gè)基因具有相同的CDS序列,共237 bp,編碼78個(gè)氨基酸,其蛋白質(zhì)含有一個(gè)信號(hào)肽,推測為分泌蛋白,且含有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,與擬南芥LCR家族同源。2.通過RT-PCR分析BnaLCR78在甘藍(lán)型油菜中的表達(dá)模式,結(jié)果顯示BnaLCR78基因在根、莖、葉、花中均不表達(dá),在果莢中痕量表達(dá),在種子中穩(wěn)定表達(dá)。通過進(jìn)一步的組織化學(xué)染色分析,發(fā)現(xiàn)BnaLCR78基因在種子的子葉中特異性表達(dá)。3.成功構(gòu)建了一系列載體:組成型啟動(dòng)子35S和種子特異型啟動(dòng)子napin啟動(dòng)的過表達(dá)載體35S::BnaLCR78、Pnapin::BnaLCR78;干擾載體35S::BnaLCR78R...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 國內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.2.1 油菜油脂研究進(jìn)展
        1.2.2 LCR基因家族的研究進(jìn)展
        1.2.3 CRISPR/Cas9 基因編輯技術(shù)研究進(jìn)展
    1.3 研究目標(biāo)與研究內(nèi)容
        1.3.1 研究目標(biāo)
        1.3.2 研究內(nèi)容
    1.4 研究目的與意義
    1.5 技術(shù)路線
第二章 甘藍(lán)型油菜Bna LCR78 基因生物信息學(xué)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 BnaLCR78 基因的理化性質(zhì)、親疏水性分析
        2.2.2 BnaLCR78 信號(hào)肽預(yù)測分析及亞細(xì)胞定位預(yù)測
        2.2.3 BnaLCR78 蛋白質(zhì)結(jié)果預(yù)測
        2.2.4 BnaLCR78 基因啟動(dòng)子元件分析
        2.2.5 BnaLCR78 蛋白的進(jìn)化關(guān)系和分類
    2.3 討論
第三章 Bna LCR78 基因GUS融合表達(dá)載體構(gòu)建及組織表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 甘藍(lán)型油菜“XY15”表達(dá)模式分析
        3.2.2 P78::GUS融合表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選與PCR檢測
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的GUS染色結(jié)果
    3.3 討論
第四章 Bna LCR78 基因過表達(dá)、干擾、敲除載體構(gòu)建
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 35S::Bna LCR78與Pnapin::Bna LCR78 過表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 35S::Bna LCR78RNAi與 Pnapin::Bna LCR78RNAi載體構(gòu)建
        4.2.3 pYLCRISPR/Cas9-78 載體構(gòu)建
        4.2.4 sg RNA-Cas9-78 載體構(gòu)建
    4.3 討論
第五章 甘藍(lán)型油菜“湘油15”的遺傳轉(zhuǎn)化
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 油菜轉(zhuǎn)基因植株獲得
        5.2.2 轉(zhuǎn)基因植株分子檢測結(jié)果
        5.2.3 轉(zhuǎn)基因植株突變頻率與類型
    5.3 討論
第六章 全文總結(jié)和創(chuàng)新點(diǎn)
    6.1 全文總結(jié)
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ
附錄Ⅱ
致謝
作者簡歷



本文編號(hào)：3862259