發(fā)布時間：2023-11-11 08:13

　　油菜種子發(fā)育與油脂的合成代謝是一個復雜的網絡調控系統(tǒng)。本研究以實驗室早期獲得的一個在油菜種子發(fā)育后期表達的功能未知基因——BnaLCR78為研究對象,利用生物信息學方法、分子生物學、分子遺傳學等技術手段,對該基因結構與功能進行了初步研究,獲得了如下研究結果:1.通過生物信息學分析發(fā)現BnaLCR78在甘藍型油菜A組和C組中分別存在1個拷貝,BnaLCR78.A基因全長531 bp,BnaLCR78.C基因全長538 bp,兩個基因具有相同的CDS序列,共237 bp,編碼78個氨基酸,其蛋白質含有一個信號肽,推測為分泌蛋白,且含有一個跨膜結構域,與擬南芥LCR家族同源。2.通過RT-PCR分析BnaLCR78在甘藍型油菜中的表達模式,結果顯示BnaLCR78基因在根、莖、葉、花中均不表達,在果莢中痕量表達,在種子中穩(wěn)定表達。通過進一步的組織化學染色分析,發(fā)現BnaLCR78基因在種子的子葉中特異性表達。3.成功構建了一系列載體:組成型啟動子35S和種子特異型啟動子napin啟動的過表達載體35S::BnaLCR78、Pnapin::BnaLCR78;干擾載體35S::BnaLCR78R...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 國內外研究進展
        1.2.1 油菜油脂研究進展
        1.2.2 LCR基因家族的研究進展
        1.2.3 CRISPR/Cas9 基因編輯技術研究進展
    1.3 研究目標與研究內容
        1.3.1 研究目標
        1.3.2 研究內容
    1.4 研究目的與意義
    1.5 技術路線
第二章 甘藍型油菜Bna LCR78 基因生物信息學分析
    2.1 實驗方法
    2.2 結果與分析
        2.2.1 BnaLCR78 基因的理化性質、親疏水性分析
        2.2.2 BnaLCR78 信號肽預測分析及亞細胞定位預測
        2.2.3 BnaLCR78 蛋白質結果預測
        2.2.4 BnaLCR78 基因啟動子元件分析
        2.2.5 BnaLCR78 蛋白的進化關系和分類
    2.3 討論
第三章 Bna LCR78 基因GUS融合表達載體構建及組織表達分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結果與分析
        3.2.1 甘藍型油菜“XY15”表達模式分析
        3.2.2 P78::GUS融合表達載體構建
        3.2.3 轉基因擬南芥的篩選與PCR檢測
        3.2.4 轉基因植株的GUS染色結果
    3.3 討論
第四章 Bna LCR78 基因過表達、干擾、敲除載體構建
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結果與分析
        4.2.1 35S::Bna LCR78與Pnapin::Bna LCR78 過表達載體構建
        4.2.2 35S::Bna LCR78RNAi與 Pnapin::Bna LCR78RNAi載體構建
        4.2.3 pYLCRISPR/Cas9-78 載體構建
        4.2.4 sg RNA-Cas9-78 載體構建
    4.3 討論
第五章 甘藍型油菜“湘油15”的遺傳轉化
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結果與分析
        5.2.1 油菜轉基因植株獲得
        5.2.2 轉基因植株分子檢測結果
        5.2.3 轉基因植株突變頻率與類型
    5.3 討論
第六章 全文總結和創(chuàng)新點
    6.1 全文總結
    6.2 創(chuàng)新點
參考文獻
附錄Ⅰ
附錄Ⅱ
致謝
作者簡歷



本文編號：3862259