為研究水孔蛋白分子功能,本研究以番茄(Solanum lycopersicum)矮化品種‘Micro-Tom’為材料,采用RTPCR技術(shù)克隆得到1個(gè)液泡膜內(nèi)在蛋白(tonoplast intrinsic proteins, TIPs)類的水孔蛋白基因,命名為SlTIP-1,其開放閱讀框(ORF)長753 bp,編碼250個(gè)氨基酸�；蚪Y(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)SlTIP-1有3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子。生物信息學(xué)分析表明SlTIP-1蛋白含有6個(gè)跨膜區(qū)及2個(gè)NPA (天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸)基序,具有MIP超家族典型的蛋白保守區(qū)序列特征。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明, SlTIP-1蛋白與野生種潘那利番茄TIP共聚于一支。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明, SlTIP-1在番茄根中特異性表達(dá)。將SlTIP-1基因起始密碼子上游1 085 bp的序列構(gòu)建到植物表達(dá)載體pBI121中,轉(zhuǎn)化擬南芥(Arabidopsis thaliana)并進(jìn)行GUS組織化學(xué)染色分析。結(jié)果表明, SlTIP-1基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GUS基因在擬南芥根部特異性表達(dá),與實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果一致。本研究擬為進(jìn)一步探索該基因的功能及番茄分子輔助育種提供理論依據(jù)...

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圖1pBI121-pSlTIP-1表達(dá)載體示意圖

SlTIP-1相對分子質(zhì)量為25075.27Da,等電點(diǎn)(pI)為5.67,不穩(wěn)定指數(shù)、脂肪族指數(shù)和總平均疏水性分別為28.15、114.8和0.950。該蛋白由20種氨基酸組成,含量最高的3位分別是:丙氨酸(Ala)15.6%、甘氨酸(Gly)14.4%和亮氨酸(Leu)1....

圖2SlTIP-1基因的克隆

圖6SlTIP-1與相關(guān)物種TIP蛋白的系統(tǒng)發(fā)育分析3討論

圖5SlTIP-1與其他植物中TIP氨基酸序列的同源性比較

AQPs屬于多基因家族,番茄基因組中共有44個(gè)AQPs,分別屬于TIP、PIP、NIP和SIP4個(gè)亞家族,其中TIPs按照種類多少又分為TIP2、TIP5、TIP4、TIP1和TIP3五個(gè)不同的群(李菲等2018)。本研究從番茄根系中克隆獲得AQPs基因SlTIP-1,生物信....

圖3SlTIP-1蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域分析

圖8pBI121-pSITIP-1表達(dá)載體的構(gòu)建圖10pSlTIP-1啟動(dòng)子GUS表達(dá)模式分析

本文編號(hào)：4006301