為探討大豆PHD-finger轉(zhuǎn)錄因子家族編碼基因GmPHD3在抵抗中國(guó)南方高溫高濕非生物脅迫造成種子劣變過(guò)程中的調(diào)控作用,分離全長(zhǎng)GmPHD3基因并進(jìn)行生物信息學(xué)分析、亞細(xì)胞定位和轉(zhuǎn)錄激活活性分析,以種子劣變抗性品種湘豆3號(hào)和不抗品種寧鎮(zhèn)1號(hào)葉片及不同組織cDNA為材料,通過(guò)RT-PCR,進(jìn)行組織表達(dá)模式分析和高溫高濕脅迫下的表達(dá)模式分析。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明基因CDS序列長(zhǎng)度為738 bp,編碼246個(gè)氨基酸,包含Alfin和PHD-finger 2個(gè)結(jié)構(gòu)域。進(jìn)化樹結(jié)果表明該基因與木豆ALFIN-Like 3-like（XM₀20363358.1）的遺傳距離較近。亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示該蛋白在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)。轉(zhuǎn)錄激活試驗(yàn)結(jié)果表明基因全長(zhǎng)有轉(zhuǎn)錄激活活性,激活域?yàn)镹端Alfin結(jié)構(gòu)域,C端PHD-finger結(jié)構(gòu)域無(wú)轉(zhuǎn)錄激活活性。組織表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn)該基因主要在成熟期高表達(dá),且2個(gè)品種間存在差異。脅迫下的表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn)隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng),基因的表達(dá)量逐漸升高。研究結(jié)果為進(jìn)一步闡明高溫高濕脅迫下的調(diào)控機(jī)制研究奠定一定理論基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    1.3 方法
        1.3.1 RNA提取與cDNA第一鏈合成
        1.3.2 基因的分離與生物信息學(xué)分析
        1.3.3 亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建及蛋白定位觀察
        1.3.4 酵母表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)錄激活活性分析
        1.3.5 qRT-PCR分析
    1.4 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 基因的分離與生物信息學(xué)分析
    2.2 GmPHD3蛋白的亞細(xì)胞定位
    2.3 轉(zhuǎn)錄激活活性分析
    2.4 組織表達(dá)模式分析
    2.5 高溫高濕脅迫下的基因表達(dá)模式分析
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號(hào)：4006154