研究背景及目的:mRNA翻譯調(diào)控機(jī)制一直是細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)重要科學(xué)問題和研究熱點(diǎn),這不僅因?yàn)樗兄谖覀冋莆占?xì)胞生物學(xué)行為及功能的發(fā)生機(jī)制,而且有助于我們了解個(gè)體發(fā)育以及眾多疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制,為探索疾病的防治提供新的理論和藥物篩選靶點(diǎn)。真核細(xì)胞mRNA在細(xì)胞核中轉(zhuǎn)錄、剪切后輸出到細(xì)胞質(zhì)中翻譯形成細(xì)胞蛋白,在細(xì)胞質(zhì)中多種信號通路的調(diào)節(jié)下進(jìn)行翻譯后修飾,從而發(fā)揮蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能。機(jī)制性雷帕霉素靶分子(mechanistic target of rapamycin,mTOR)是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸類蛋白激酶,mTOR以mTORC1和mTORC2兩種復(fù)合物形式存在,參與細(xì)胞代謝、增殖遷移和自噬凋亡等過程。研究表明mTORC1通過磷酸化其下游底物4E-BP促進(jìn)mRNA的翻譯,而由mi RNA與靶mRNA、Ago蛋白、GW182蛋白等結(jié)合形成的mi RNA介導(dǎo)的靜默復(fù)合體(RISC)是負(fù)性調(diào)控mRNA翻譯的重要機(jī)制。那么,細(xì)胞作為一個(gè)整體是如何協(xié)調(diào)這兩種相反的mRNA翻譯調(diào)控機(jī)制的呢?mTORC1是否以及如何調(diào)控RISC-mi RNAs功能的呢?既往研究主要集中于mTORC1...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 mTOR信號通路
    1.2 mTOR信號通路的調(diào)控
    1.3 miRNA
    1.4 mRNA翻譯的調(diào)控
    1.5 RISC
        1.5.1 Ago2在基因靜默中的作用
        1.5.2 GW182在基因靜默中的作用
    1.6 小結(jié)
第二章 研究目的、方法、內(nèi)容和意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 研究內(nèi)容
        2.3.1 mTORC1與Ago2蛋白結(jié)合及機(jī)制研究
        2.3.2 mTORC1對Ago2387 絲氨酸位點(diǎn)磷酸化水平影響
        2.3.3 mTORC1磷酸化Ago2387 絲氨酸位點(diǎn)對其功能影響
    2.4 研究意義
第三章 mTORC1與Ago2蛋白結(jié)合及機(jī)制研究
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要試劑配制
        3.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.3 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）
        3.2.4 蛋白免疫印跡技術(shù)
        3.2.5 GST-Pulldown實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 質(zhì)粒構(gòu)建
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 mTORC1與Ago2蛋白結(jié)合
        3.3.2 mTORC1與Ago2 PAZ結(jié)構(gòu)域結(jié)合
    3.4 討論
第四章 mTORC1磷酸化Ago2387 絲氨酸位點(diǎn)及機(jī)制研究
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒
        4.1.2 主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 體外激酶實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 HA-Ago2387 絲氨酸位點(diǎn)突變體質(zhì)粒構(gòu)建
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
第五章 mTORC1磷酸化Ago2 S387對其功能影響
    5.1 材料
        5.1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒
        5.1.2 主要試劑
    5.2 方法
        5.2.1 RIP（RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀）實(shí)驗(yàn)
        5.2.2 捆綁實(shí)驗(yàn)
        5.2.3 HA-Ago2 C端 5A/5E突變體質(zhì)粒構(gòu)建
        5.2.4 Crispr/Cas9細(xì)胞株構(gòu)建ANKRD52-/-細(xì)胞株
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 mTORC1激活后Ago2蛋白結(jié)合RNA能力減弱
        5.3.2 Ago2387 絲氨酸位點(diǎn)磷酸化水平影響GW182蛋白的結(jié)合
        5.3.3 Ago2387 絲氨酸位點(diǎn)磷酸化水平影響其靜默功能
        5.3.4 Ago2 C端多個(gè)位點(diǎn)磷酸化水平對387絲氨酸位點(diǎn)磷酸化的影響
    5.4 討論
第六章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
綜述：mTOR信號通路與miRNA相互調(diào)控研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及參加的會議



本文編號：3856452