研究背景及目的:mRNA翻譯調(diào)控機制一直是細胞生物學領(lǐng)域的一個重要科學問題和研究熱點,這不僅因為它有助于我們掌握細胞生物學行為及功能的發(fā)生機制,而且有助于我們了解個體發(fā)育以及眾多疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機制,為探索疾病的防治提供新的理論和藥物篩選靶點。真核細胞mRNA在細胞核中轉(zhuǎn)錄、剪切后輸出到細胞質(zhì)中翻譯形成細胞蛋白,在細胞質(zhì)中多種信號通路的調(diào)節(jié)下進行翻譯后修飾,從而發(fā)揮蛋白質(zhì)的生物學功能。機制性雷帕霉素靶分子(mechanistic target of rapamycin,mTOR)是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸類蛋白激酶,mTOR以mTORC1和mTORC2兩種復合物形式存在,參與細胞代謝、增殖遷移和自噬凋亡等過程。研究表明mTORC1通過磷酸化其下游底物4E-BP促進mRNA的翻譯,而由mi RNA與靶mRNA、Ago蛋白、GW182蛋白等結(jié)合形成的mi RNA介導的靜默復合體(RISC)是負性調(diào)控mRNA翻譯的重要機制。那么,細胞作為一個整體是如何協(xié)調(diào)這兩種相反的mRNA翻譯調(diào)控機制的呢?mTORC1是否以及如何調(diào)控RISC-mi RNAs功能的呢?既往研究主要集中于mTORC1...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 mTOR信號通路
    1.2 mTOR信號通路的調(diào)控
    1.3 miRNA
    1.4 mRNA翻譯的調(diào)控
    1.5 RISC
        1.5.1 Ago2在基因靜默中的作用
        1.5.2 GW182在基因靜默中的作用
    1.6 小結(jié)
第二章 研究目的、方法、內(nèi)容和意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 研究內(nèi)容
        2.3.1 mTORC1與Ago2蛋白結(jié)合及機制研究
        2.3.2 mTORC1對Ago2387 絲氨酸位點磷酸化水平影響
        2.3.3 mTORC1磷酸化Ago2387 絲氨酸位點對其功能影響
    2.4 研究意義
第三章 mTORC1與Ago2蛋白結(jié)合及機制研究
    3.1 材料
        3.1.1 細胞株、質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要試劑配制
        3.1.4 主要實驗儀器
    3.2 方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 細胞轉(zhuǎn)染
        3.2.3 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）
        3.2.4 蛋白免疫印跡技術(shù)
        3.2.5 GST-Pulldown實驗
        3.2.6 質(zhì)粒構(gòu)建
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 mTORC1與Ago2蛋白結(jié)合
        3.3.2 mTORC1與Ago2 PAZ結(jié)構(gòu)域結(jié)合
    3.4 討論
第四章 mTORC1磷酸化Ago2387 絲氨酸位點及機制研究
    4.1 材料
        4.1.1 細胞株、質(zhì)粒
        4.1.2 主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 體外激酶實驗
        4.2.2 HA-Ago2387 絲氨酸位點突變體質(zhì)粒構(gòu)建
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
第五章 mTORC1磷酸化Ago2 S387對其功能影響
    5.1 材料
        5.1.1 細胞株、質(zhì)粒
        5.1.2 主要試劑
    5.2 方法
        5.2.1 RIP（RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀）實驗
        5.2.2 捆綁實驗
        5.2.3 HA-Ago2 C端 5A/5E突變體質(zhì)粒構(gòu)建
        5.2.4 Crispr/Cas9細胞株構(gòu)建ANKRD52-/-細胞株
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 mTORC1激活后Ago2蛋白結(jié)合RNA能力減弱
        5.3.2 Ago2387 絲氨酸位點磷酸化水平影響GW182蛋白的結(jié)合
        5.3.3 Ago2387 絲氨酸位點磷酸化水平影響其靜默功能
        5.3.4 Ago2 C端多個位點磷酸化水平對387絲氨酸位點磷酸化的影響
    5.4 討論
第六章 結(jié)論與展望
參考文獻
綜述：mTOR信號通路與miRNA相互調(diào)控研究進展
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及參加的會議



本文編號：3856452