果膠酶作為添加劑廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)的果汁澄清工藝中,發(fā)現(xiàn)和挖掘適用于工業(yè)應(yīng)用的優(yōu)質(zhì)果膠酶,能夠?yàn)楣I(yè)應(yīng)用提供更多的選擇。本文從嗜熱Talaromyces leycettanus JCM 12802菌株中克隆得到三個(gè)多聚半乳糖醛酸酶基因Tepg28a、Tepg28b、Tepg28c,其中一個(gè)為外切型兩個(gè)為內(nèi)切型,并全部在畢赤酵母GS115中實(shí)現(xiàn)高效異源表達(dá)。對純化后的三個(gè)重組蛋白進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)的研究,其最適pH和最適溫度均一致,分別為3.5和70 oC,三者在酸性至中性的環(huán)境中都具有很好的pH穩(wěn)定性,在60 oC的高溫環(huán)境下保持高度穩(wěn)定性,同時(shí)在70oC中保溫10 min后仍能剩余40%的剩余酶活,值得注意的是TePG28c的比活高達(dá)51786 U/mg,要高于目前報(bào)道所有多聚半乳糖醛酸酶。基于Tepg28a和Tepg28b為兩種不同類型的多聚半乳糖醛酸酶,他們對聚糖切割方式的不同,在其添加比TePG28a:TePG28b=2:3(U:U)的時(shí)候?qū)﹂倨すz表現(xiàn)出很好的協(xié)同作用,是單獨(dú)使用一種酶的作用效果的240%,并且兩個(gè)酶能夠協(xié)同作用于天然葡萄汁的澄清,使葡萄汁的透光度從20%提升到80...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 果膠
        1.1.1 果膠的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 果膠的分類
    1.2 果膠酶
        1.2.1 果膠酶的分類
        1.2.2 果膠酶的應(yīng)用
    1.3 多聚半乳糖醛酸酶的研究進(jìn)展
        1.3.1 多聚半乳糖醛酸酶的來源
        1.3.2 多聚半乳糖醛酸酶的結(jié)構(gòu)
        1.3.3 多聚半乳糖醛酸酶的功能
        1.3.4 多聚半乳糖醛酸酶的性質(zhì)
    1.4 酶的分子改造策略
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 Talaromyces leycettanus JCM 12802 來源嗜熱多聚半乳糖醛酸酶基因的挖掘
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株和載體
        2.1.2 培養(yǎng)基和溶液的配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 生化試劑、試劑盒和工具酶
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 多聚半乳糖醛酸酶的酶活標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.2.2 多聚半乳糖醛酸酶酶活的測定
        2.2.3 T. leycettanus JCM12802菌株產(chǎn)多聚半乳糖醛酸酶的評估
        2.2.4 T. leycettanus JCM12802來源多聚半乳糖醛酸酶基因的獲取
        2.2.5 T. leycettanus JCM12802多聚半乳糖醛酸酶基因c DNA序列的擴(kuò)增
        2.2.6 T. leycettanus JCM 12802 中聚半乳糖醛酸酶表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.7 T. leycettanus JCM 12802 多聚半乳糖醛酸酶的酵母表達(dá)
        2.2.8 多聚半乳糖醛酸酶的純化、脫糖基及定量
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 多聚半乳糖醛酸酶的酶活標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.3.2 T. leycettanus JCM12802菌株產(chǎn)多聚半乳糖醛酸酶的評估
        2.3.3 T. leycettanus JCM12802聚半乳糖醛酸的基因獲取及分析
        2.3.4 T. leycettanus JCM12802多聚半乳糖醛酸酶的表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
        2.3.5 多聚半乳糖醛酸酶的酵母表達(dá)及其蛋白純化
    2.4 本章小結(jié)
第三章 Talaromyces leycettanus JCM 12802 來源多聚半乳糖醛酸酶的酶學(xué)性質(zhì)研究及其協(xié)同應(yīng)用的評估
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 溶液的配制
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 生化試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 聚半乳糖醛酸酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
        3.2.2 動(dòng)力學(xué)常數(shù)
        3.2.3 底物特異性
        3.2.4 產(chǎn)物分析
        3.2.5 內(nèi)切型和外切型多聚半乳糖醛酸酶的協(xié)同作用
        3.2.6 葡萄汁的澄清實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 酶學(xué)性質(zhì)分析
        3.3.2 動(dòng)力學(xué)常數(shù)
        3.3.3 底物特異性
        3.3.4 產(chǎn)物分析
        3.3.5 協(xié)同作用
        3.3.6 葡萄汁澄清實(shí)驗(yàn)
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 多聚半乳糖醛酸酶催化效率的分子改造
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 菌株和質(zhì)粒
        4.1.2 培養(yǎng)基和溶液的配制
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 生化試劑、試劑盒和工具酶
        4.1.5 野生型多聚半乳糖醛酸酶
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 多聚半乳糖醛酸酶的同源建模和比對
        4.2.2 分子改造的策略
        4.2.3 點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)
        4.2.4 突變表達(dá)載體的酵母表達(dá)及純化
        4.2.5 突變重組酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 Te PG28b和Bs PG28a的同源建模
        4.3.2 點(diǎn)突變載體的構(gòu)建
        4.3.3 突變蛋白的表達(dá)和純化
        4.3.4 突變體的酶學(xué)性質(zhì)研究
    4.4 本章小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3857013