白介素10(Interleukin-10,IL-10)是一種多功能的細(xì)胞因子,同時(shí)具有免疫增強(qiáng)和免疫抑制作用,但其主要作用是免疫抑制。有些病毒在感染宿主時(shí),通過上調(diào)宿主IL-10的表達(dá)或編碼IL-10類似物,即病毒IL-10(Viral interleukin-10,vIL-10),逃避宿主的免疫監(jiān)視和清除,以建立持續(xù)性感染。鯉皰疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus3,CyHV-3)是目前已知能編碼vIL-10的少數(shù)低等脊椎動(dòng)物病毒之一。本論文對(duì)CyHV-3 vIL-10基因進(jìn)行了克隆表達(dá),隨后用獲得的重組vIL-10(Recombinant viral interleukin-10,rvIL-10)蛋白刺激鯉魚頭腎巨噬細(xì)胞和鯉魚上皮瘤細(xì)胞(Epithelioma papulosum cyprini,EPC),利用熒光定量PCR、Tunel染色和流式細(xì)胞術(shù),檢測(cè)免疫相關(guān)因子的表達(dá)、凋亡相關(guān)因子的表達(dá)和細(xì)胞凋亡率,探討CyHV-3 vIL-10對(duì)免疫相關(guān)因子表達(dá)的影響和對(duì)EPC細(xì)胞凋亡的影響。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,CyHV-3 vIL-10由179個(gè)氨基酸組成,含有一個(gè)...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 白介素10的研究進(jìn)展
        1.1 IL-10 來源
        1.2 IL-10 家族
        1.3 IL-10 受體
        1.4 IL-10 的生物學(xué)活性
        1.5 IL-10 抑制細(xì)胞凋亡
        1.6 鯉魚IL-10
    2 病毒白細(xì)胞介素10的研究進(jìn)展
        2.1 vIL-10 基因結(jié)構(gòu)
        2.2 vIL-10 的蛋白結(jié)構(gòu)
        2.3 vIL-10 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
        2.4 vIL-10 在體外的生物學(xué)活性
        2.5 vIL-10 在體內(nèi)的生物學(xué)活性
        2.6 vIL-10 的應(yīng)用研究
    3 鯉皰疹病毒3型的研究進(jìn)展
        3.1 病毒的基因組及蛋白質(zhì)組特征
        3.2 KHVD的流行病學(xué)
        3.3 CyHV-3 編碼的細(xì)胞因子及細(xì)胞因子受體
    4 本研究的目的和意義
第二章 鯉皰疹病毒3型vIL-10 基因的克隆表達(dá)及生物信息學(xué)分析
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及病毒株
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 CyHV-3 vIL-10 基因的克隆
        2.2 生物信息學(xué)分析
        2.3 CyHV-3 vIL-10 去信號(hào)肽基因的克隆
        2.4 CyHV-3 vIL-10 去信號(hào)肽基因的表達(dá)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 CyHV-3 vIL-10 基因的擴(kuò)增、克隆及鑒定
        3.2 CyHV-3 vIL-10 的生物信息學(xué)分析
        3.3 CyHV-3 vIL-10 去信號(hào)肽基因的擴(kuò)增、克隆及鑒定
        3.4 CyHV-3 vIL-10 原核表達(dá)載體構(gòu)建及鑒定
        3.5 rvIL-10 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.6 rvIL-10 蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的條件優(yōu)化
        3.7 rvIL-10 蛋白的純化及特異性檢測(cè)
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 rvIL-10 蛋白對(duì)宿主免疫相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)的重組蛋白
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 鯉魚頭腎巨噬細(xì)胞的分離
        2.2 rvIL-10 蛋白對(duì)鯉魚頭腎巨噬細(xì)胞的刺激
        2.3 細(xì)胞總RNA的提取和c DNA的合成
        2.4 熒光定量PCR檢測(cè)免疫相關(guān)因子的表達(dá)
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 rvIL-10 蛋白對(duì)免疫相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.2 rvIL-10 蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的免疫相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.3 rvIL-10 蛋白在不同時(shí)間對(duì)免疫相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.4 rvIL-10 蛋白在不同時(shí)間對(duì)LPS誘導(dǎo)的免疫相關(guān)因子表達(dá)的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第四章 rvIL-10 蛋白拮抗鯉魚上皮瘤細(xì)胞凋亡的初步研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)的重組蛋白
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 rvIL-10 蛋白對(duì)EPC細(xì)胞的刺激
        2.2 Tunel染色檢測(cè)EPC細(xì)胞凋亡
        2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EPC細(xì)胞凋亡
        2.4 熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因的表達(dá)
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 Tunel染色檢測(cè)rvIL-10 蛋白對(duì)EPC細(xì)胞凋亡的影響
        3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)rvIL-10 蛋白對(duì)EPC細(xì)胞凋亡的影響
        3.3 rvIL-10 蛋白對(duì)凋亡相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)
    4 討論
    5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3850973