白介素10(Interleukin-10,IL-10)是一種多功能的細胞因子,同時具有免疫增強和免疫抑制作用,但其主要作用是免疫抑制。有些病毒在感染宿主時,通過上調(diào)宿主IL-10的表達或編碼IL-10類似物,即病毒IL-10(Viral interleukin-10,vIL-10),逃避宿主的免疫監(jiān)視和清除,以建立持續(xù)性感染。鯉皰疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus3,CyHV-3)是目前已知能編碼vIL-10的少數(shù)低等脊椎動物病毒之一。本論文對CyHV-3 vIL-10基因進行了克隆表達,隨后用獲得的重組vIL-10(Recombinant viral interleukin-10,rvIL-10)蛋白刺激鯉魚頭腎巨噬細胞和鯉魚上皮瘤細胞(Epithelioma papulosum cyprini,EPC),利用熒光定量PCR、Tunel染色和流式細胞術(shù),檢測免疫相關(guān)因子的表達、凋亡相關(guān)因子的表達和細胞凋亡率,探討CyHV-3 vIL-10對免疫相關(guān)因子表達的影響和對EPC細胞凋亡的影響。生物信息學分析結(jié)果顯示,CyHV-3 vIL-10由179個氨基酸組成,含有一個...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
符號說明
第一章 文獻綜述
    1 白介素10的研究進展
        1.1 IL-10 來源
        1.2 IL-10 家族
        1.3 IL-10 受體
        1.4 IL-10 的生物學活性
        1.5 IL-10 抑制細胞凋亡
        1.6 鯉魚IL-10
    2 病毒白細胞介素10的研究進展
        2.1 vIL-10 基因結(jié)構(gòu)
        2.2 vIL-10 的蛋白結(jié)構(gòu)
        2.3 vIL-10 的轉(zhuǎn)錄表達
        2.4 vIL-10 在體外的生物學活性
        2.5 vIL-10 在體內(nèi)的生物學活性
        2.6 vIL-10 的應用研究
    3 鯉皰疹病毒3型的研究進展
        3.1 病毒的基因組及蛋白質(zhì)組特征
        3.2 KHVD的流行病學
        3.3 CyHV-3 編碼的細胞因子及細胞因子受體
    4 本研究的目的和意義
第二章 鯉皰疹病毒3型vIL-10 基因的克隆表達及生物信息學分析
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞及病毒株
        1.2 主要實驗試劑
        1.3 主要實驗設備
    2 實驗方法
        2.1 CyHV-3 vIL-10 基因的克隆
        2.2 生物信息學分析
        2.3 CyHV-3 vIL-10 去信號肽基因的克隆
        2.4 CyHV-3 vIL-10 去信號肽基因的表達
    3 實驗結(jié)果
        3.1 CyHV-3 vIL-10 基因的擴增、克隆及鑒定
        3.2 CyHV-3 vIL-10 的生物信息學分析
        3.3 CyHV-3 vIL-10 去信號肽基因的擴增、克隆及鑒定
        3.4 CyHV-3 vIL-10 原核表達載體構(gòu)建及鑒定
        3.5 rvIL-10 蛋白的誘導表達
        3.6 rvIL-10 蛋白誘導表達的條件優(yōu)化
        3.7 rvIL-10 蛋白的純化及特異性檢測
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 rvIL-10 蛋白對宿主免疫相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗的重組蛋白
        1.3 主要實驗試劑
        1.4 主要實驗設備
    2 實驗方法
        2.1 鯉魚頭腎巨噬細胞的分離
        2.2 rvIL-10 蛋白對鯉魚頭腎巨噬細胞的刺激
        2.3 細胞總RNA的提取和c DNA的合成
        2.4 熒光定量PCR檢測免疫相關(guān)因子的表達
        2.5 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 rvIL-10 蛋白對免疫相關(guān)因子表達的影響
        3.2 rvIL-10 蛋白對LPS誘導的免疫相關(guān)因子表達的影響
        3.3 rvIL-10 蛋白在不同時間對免疫相關(guān)因子表達的影響
        3.4 rvIL-10 蛋白在不同時間對LPS誘導的免疫相關(guān)因子表達的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第四章 rvIL-10 蛋白拮抗鯉魚上皮瘤細胞凋亡的初步研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗的重組蛋白
        1.3 主要實驗試劑
        1.4 主要實驗設備
    2 實驗方法
        2.1 rvIL-10 蛋白對EPC細胞的刺激
        2.2 Tunel染色檢測EPC細胞凋亡
        2.3 流式細胞術(shù)檢測EPC細胞凋亡
        2.4 熒光定量PCR檢測細胞中凋亡相關(guān)基因的表達
        2.5 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 Tunel染色檢測rvIL-10 蛋白對EPC細胞凋亡的影響
        3.2 流式細胞術(shù)檢測rvIL-10 蛋白對EPC細胞凋亡的影響
        3.3 rvIL-10 蛋白對凋亡相關(guān)基因表達的調(diào)節(jié)
    4 討論
    5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3850973