該研究利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9)基因編輯系統(tǒng)構(gòu)建了TP53(tumor antigen p53)基因敲除He La細(xì)胞系。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠精確地切開(kāi)TP53基因并在雙鏈斷裂處插入選擇標(biāo)記(通過(guò)與供體質(zhì)粒進(jìn)行同源重組獲得)。進(jìn)一步的功能試驗(yàn)表明,TP53基因敲除的He La細(xì)胞擁有更強(qiáng)的細(xì)胞增殖能力、化療耐藥性以及氧化應(yīng)激能力,提示He La(TP53–/–)惡性程度增強(qiáng)。所有的數(shù)據(jù)旨在描述一個(gè)簡(jiǎn)單和有效的方法,即通過(guò)CRISPR/Cas9系統(tǒng)來(lái)構(gòu)建基因缺失細(xì)胞系,期望在較大程度上幫助研究和闡明基因功能以及細(xì)胞機(jī)制。

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【文章目錄】：
1 Materials and methods
    1.1 Cell culture and plasmids construction
    1.2 Transfection and selection
    1.3 T7EI assay
    1.4 PCR genotyping of single clones
    1.5 Western blot assay
    1.6 MTT assay
    1.7 Statistical analysis
2 Results
    2.1 Generation of TP53 knockout in He La cells
    2.2 Phenotypic characterization of He La(TP53–/–)cells obtained after CRISPR treatment
3 Discussion



本文編號(hào)：3843054