目的:腫瘤細胞表面高表達的PD-L1分子,是一種起負調(diào)控作用的免疫抑制分子,通過與T淋巴細胞表面的PD-1分子相互作用,導(dǎo)致T細胞免疫應(yīng)答功能受到抑制,并使CD8+T淋巴細胞的抗腫瘤功能減弱。在本研究中,我們應(yīng)用FA-GNRsiPD-L1沉默腫瘤細胞PD-L1的表達,進而阻斷PD-L1與PD-1之間的相互作用,恢復(fù)CD8+T淋巴細胞對腫瘤細胞的殺傷作用,從而提高免疫應(yīng)答能力。通過聯(lián)合FA-GNR的光熱作用,探討靶向腫瘤的PD-L1基因沉默免疫治療協(xié)同光熱治療對B16-BL6黑色素瘤小鼠的治療效果。方法:1.瓊脂糖凝膠阻滯實驗檢測FA-GNR對siRNA的負載能力。2.MTT法檢測FA-GNR的細胞毒性。3.流式細胞術(shù)及熒光倒置顯微鏡觀察負載Cy3-siGAPDH的FA-GNR對黑色素瘤細胞B16-BL6的轉(zhuǎn)染效率。4.q-PCR及流式細胞術(shù)檢測FA-GNR-siPD-L1對B16-BL6細胞PD-L1基因/蛋白的沉默效果。5.siPD-L1沉默后的B16-BL6黑色素瘤細胞與B16-BL6黑色素瘤荷瘤C57BL/6小鼠的T細胞混合培養(yǎng),q-PCR檢測T細胞上免疫抑制分子PD-1、TIM...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗動物、試劑與設(shè)備
        2.1.1 實驗動物及細胞株
        2.1.2 主要的實驗試劑
        2.1.3 主要的實驗設(shè)備
        2.1.4 主要的試劑配制
    2.2 體外實驗
        2.2.1 金納米棒的合成、修飾與表征
        2.2.2 FA-GNR對siRNA載藥量的檢測
        2.2.3 細胞培養(yǎng)
        2.2.4 MTT檢測修飾前后金納米棒的細胞毒性
        2.2.5 FA-GNR-Cy3-GAPDH對B16-BL6細胞的轉(zhuǎn)染效率
        2.2.6 FA-GNR-siPD-L1體外沉默效果的檢測
        2.2.7 B16-BL6細胞腫瘤抗原的制備
        2.2.8 混合淋巴細胞培養(yǎng)
        2.2.9 q-PCR檢測沉默PD-L1的B16-BL6細胞對T細胞耗竭表型變化的影響及細胞因子的分泌情況
        2.2.10 Annexin V/PI染色法檢測沉默PD-L1的B16-BL6細胞對T細胞凋亡的影響
    2.3 體內(nèi)實驗
        2.3.1 FA-GNR-siPD-L1與光熱效應(yīng)協(xié)同治療黑色素瘤荷瘤小鼠
        2.3.2 流式細胞術(shù)檢測T細胞耗竭表型變化
        2.3.3 Annexin V/PI染色法檢測小鼠體內(nèi)T細胞的凋亡情況
        2.3.4 q-PCR檢測細胞因子的分泌情況
        2.3.5 CCK8檢測T細胞增殖
        2.3.6 LDH試劑盒檢測小鼠CD8+細胞的細胞毒殺傷作用
    2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 FA-GNR的合成、表征及功能化檢測
    3.2 FA-GNR-Cy3-GAPDH轉(zhuǎn)染效率的確定
    3.3 FA-GNR-siPD-L1的體外沉默效果
    3.4 PD-L1基因沉默對T細胞耗竭表型的影響及細胞因子的分泌情況
    3.5 PD-L1基因沉默對T細胞凋亡的影響
    3.6 FA-GNR-siPD-L1與光熱效應(yīng)協(xié)同治療黑色素瘤荷瘤小鼠的效果
    3.7 FA-GNR-siPD-L1治療后T細胞耗竭表型變化
    3.8 FA-GNR-siPD-L1治療后小鼠體內(nèi)T細胞的凋亡情況
    3.9 FA-GNR-siPD-L1治療后體內(nèi)沉默效果
    3.10 FA-GNR-siPD-L1治療后細胞因子的分泌情況
    3.11 FA-GNR-siPD-L1治療后T細胞增殖能力
    3.12 FA-GNR-siPD-L1治療后CD8+T淋巴細胞的細胞毒殺傷作用
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻



本文編號：3842450