目的克隆珍稀瀕危蘭科藥用植物鐵皮石斛蛋白磷酸酶(protein phosphatase,PP)基因DoPP2C2并進行生物信息學(xué)和表達模式分析。方法采用RACE和RT-PCR獲基因全長;利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)域和亞細胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0和MEGA 6.0分別進行氨基酸多序列比對和進化關(guān)系分析;借助定量PCR檢測基因表達模式。結(jié)果分離到DoPP2C2基因(Gen Bank注冊號KT957553),cDNA全長1 624 bp,編碼一條由387個氨基酸組成的多肽,相對分子質(zhì)量42.76×10³,等電點7.03; DoPP2C2蛋白具有植物PP2Cs蛋白家族保守的2個蛋白磷酸酶結(jié)構(gòu)域(91～152、216～376);該蛋白無信號肽或跨膜域,定位在細胞核,系親水性蛋白; DoPP2C2蛋白與多種植物PP2C蛋白一致性較高(47.8%～73.4%); DoPP2C2隸屬于擬南芥和水稻PP2C蛋白家族進化樹的A亞族,與OsPP2C30親緣關(guān)系較近; DoPP2C2基因表達有器官差異,根和莖中相對表達量為葉的0.76和0.59倍。結(jié)論獲...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料和取樣
    1.2 RNA提取和c DNA合成
    1.3 RACE與RT-PCR驗證
    1.4 生物信息學(xué)分析
    1.5 實時定量PCR分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 Do PP2C2基因的克隆分析
    2.2 Do PP2C2蛋白的理化特性
    2.3 Do PP2C2蛋白結(jié)構(gòu)域、二級結(jié)構(gòu)和三維建模分析
    2.4 Do PP2C2蛋白信號肽、跨膜域和定位預(yù)測分析
    2.5 Do PP2C2和植物PP2C蛋白的多序列對比分析
    2.6 Do PP2C2的分子進化樹構(gòu)建分析
    2.7 Do PP2C2基因的表達模式分析
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