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基于CRISPR/Cas9敲除及激活人結(jié)腸癌細(xì)胞HSF2基因并探索HSF2在黏膜損傷修復(fù)中的作用機(jī)制

發(fā)布時(shí)間:2024-11-14 18:47
  [目的]利用CRISPR/Case9 HSF2基因敲除/激活質(zhì)粒敲除/激活人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT-116)中熱休克轉(zhuǎn)錄因子 2(Heat Shock Transcription Factor 2,HSF2)的表達(dá),構(gòu)建出HSF2基因敲除的穩(wěn)定細(xì)胞株/增加細(xì)胞HSF2的表達(dá),分析探討HSF2對(duì)細(xì)胞增殖及腸道黏膜損傷修復(fù)相關(guān)細(xì)胞因子、蛋白表達(dá)的影響及相關(guān)信號(hào)通路的研究。[方法]1.選用人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT-116)為研究對(duì)象,利用CRISPR/Cas9基因敲除質(zhì)粒 HSF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid(h)和 HSF2 HDR Plasmid(h)共轉(zhuǎn)染HCT-116細(xì)胞,破壞細(xì)胞HSF2基因的表達(dá),經(jīng)加藥(嘌呤霉素)及反復(fù)挑選后,構(gòu)建出HSF2基因敲除的穩(wěn)定細(xì)胞株,去除HSF2蛋白表達(dá)的影響,將細(xì)胞分為正常對(duì)照組、敲除組和敲除陰性對(duì)照組;2.利用 HSF2 激活質(zhì)粒 HSF2 CRISPR Activation Plasmid(h)轉(zhuǎn)染 HCT-116 細(xì)胞,使HCT-116中的HSF2蛋白表達(dá)量增加,建立HSF2激活細(xì)胞株,將細(xì)胞分為正常對(duì)照組、激活組和激活陰性對(duì)照組...

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本文編號(hào):4011997

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