凝集素(Lectin)是一類能與糖進行非共價可逆結(jié)合的蛋白質(zhì),具有凝集細胞和聚糖的作用。在牙鲆的集約化養(yǎng)殖過程中,會面臨許多病原微生物的入侵,造成大量的經(jīng)濟損失,研究表明魚卵凝集素(Fish egg lectin)是凝集素超家族中的一員,在硬骨魚的抗菌免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用。在本研究中,克隆驗證了牙鲆FEL1基因(Fish egg lectin 1,PoFEL1),其中開放閱讀框(Open reading frame, ORF)為675 bp,編碼224個氨基酸,蛋白分子量為24.8 kDa。PoFEL1組織表達分析顯示,PoFEL1在卵巢、腸以及肝臟中的表達量比較高;胚胎發(fā)育過程中PoFEL1表達分析顯示,在胚胎發(fā)育的早期PoFEL1的表達量比較高,隨著胚胎的逐漸成熟,其表達量逐漸降低,呈母源性表達。體外細胞刺激實驗表明LPS、PGN、Poly(I∶C)和E.tarda刺激牙鲆卵巢細胞系后,PoFEL1的表達上調(diào)。利用牙鲆卵巢細胞研究了PoFEL1蛋白的亞細胞定位,證實其分布在細胞質(zhì)中。用LPS刺激過表達PoFEL1的牙鲆卵巢細胞系,發(fā)現(xiàn)細胞因子p38、IL-6和TNF-α的表達顯著上調(diào)...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 模板來源
        1.1.3 細胞系來源
    1.2 實驗方法
        1.2.1
        1.2.2 PoFEL1序列分析
        1.2.3 PoFEL1組織表達分析
        1.2.4 PoFEL1胚胎發(fā)育模式表達分析
        1.2.5 牙鲆p-EGFP-FEL1質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.6 體外細胞刺激實驗
        1.2.7 PoFEL1過表達實驗
        1.2.8 pRL-TK質(zhì)粒、NF-κB熒光素酶質(zhì)粒與重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞
        1.2.9 實時熒光定量(qRT-PCR)
        1.2.10 數(shù)據(jù)處理
2 實驗結(jié)果
    2.1 PoFEL1序列分析
        2.1.1 PoFEL1的ORF序列擴增
        2.1.2 PoFEL1的系統(tǒng)進化分析
    2.2 PoFEL1的組織表達分析
    2.3 PoFEL1的發(fā)育表達模式分析
    2.4 免疫刺激牙鲆卵巢細胞系后PoFEL1的mRNA表達水平分析
    2.5 過表達PoFEL1對p38,IL-6,TNF-α等細胞因子的調(diào)節(jié)作用
    2.6 PoFEL1的亞細胞定位
    2.7 過表達PoFEL1對NF-κB的影響
3 討論



本文編號：3829713