目的構(gòu)建靶向抑制β-1,4-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶1(B4GALNT1)基因表達(dá)的shRNA慢病毒載體,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至人腎癌細(xì)胞株786-O中,觀察轉(zhuǎn)染后抑制效率及對786-O細(xì)胞增殖活性的影響。方法構(gòu)建特異性靶向抑制B4GALNT1基因表達(dá)的shRNA慢病毒載體(shB4GALNT1),通過瓊脂糖凝膠電泳和陽性克隆測序鑒定載體的構(gòu)建;慢病毒包裝并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至腎癌786-O細(xì)胞中,通過熒光顯微鏡觀察shRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞;實(shí)驗(yàn)分為3組:空白對照(NC)組、轉(zhuǎn)染空載體(VC)組和轉(zhuǎn)染shB4GALNT1(KD)組,分別通過Western blot和實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)來證實(shí)轉(zhuǎn)染shB4GALNT1在蛋白與mRNA表達(dá)水平的抑制效率;通過Celigo全視野細(xì)胞掃描分析抑制B4GALNT1表達(dá)對786-O細(xì)胞增殖活性的影響。結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)陽性克隆為341bp,陽性克隆測序證實(shí)B4GALNT1shRNA慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功;綠色熒光蛋白表達(dá)證實(shí)B4GALNT1shRNA慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至腎癌786-O細(xì)胞中;NC組、VC組和KD組B4GALNT1蛋白的相對表達(dá)量分別為1.013±0.0...

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    一、材料與試劑
    二、方法
結(jié)果
    一、B4GALNT1shRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    二、B4GALNT1shRNA慢病毒載體的包裝和轉(zhuǎn)染786-O細(xì)胞株
    三、鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染B4GALNT1shRNA的786-O細(xì)胞建立
    四、抑制B4GALNT1表達(dá)對786-O細(xì)胞增殖活性的影響
討論



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