該研究構(gòu)建植物表達載體pBin438-Vip3A,通過農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化棉花品種‘冀合713’,將新型抗蟲基因Vip3A導入到棉花植株,創(chuàng)制對棉鈴蟲抗性的轉(zhuǎn)基因棉花新種質(zhì)。結(jié)果表明:(1)PCR檢測Vip3A基因已經(jīng)導入到棉花基因組中且能夠穩(wěn)定遺傳。(2)室內(nèi)抗蟲性鑒定表明,與對照相比轉(zhuǎn)基因植株對棉鈴蟲的抗性顯著提高,并獲得2株高抗和3株抗棉鈴蟲的轉(zhuǎn)Vip3A基因株系。(3)Southern blotting結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因株系BV01為單拷貝。(4)Elisa檢測表明,外源Vip3A基因在BV01的根、莖、葉、花、種子中都有表達,在葉片中的Vip3A蛋白表達為苗期>蕾期>花期>鈴期>吐絮期。該研究創(chuàng)制了新型抗蟲轉(zhuǎn)基因棉花材料,為培育棉花新型抗蟲品種提供了種質(zhì)資源。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 供試材料
    1.2 方 法
        1.2.1 重組質(zhì)粒pBin438-Vip3A的構(gòu)建
        1.2.2 農(nóng)桿菌介導的棉花下胚軸的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.2.3 棉花總DNA的提取及PCR檢測
        1.2.4 轉(zhuǎn)基因棉花植株的Southern blotting 檢測
        1.2.5 轉(zhuǎn)基因植株蛋白表達檢測分析
        1.2.6 轉(zhuǎn)基因棉花植株的抗蟲性鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 農(nóng)桿菌介導的棉花轉(zhuǎn)化植株的獲得
    2.2 轉(zhuǎn)基因棉花株系的抗性篩選和PCR檢測
    2.3 轉(zhuǎn)Vip3A基因棉花植株的抗蟲性檢測
    2.4 轉(zhuǎn)基因株系VB1 Southern blotting和Elisa分析
3 討 論



本文編號：3804805