目的:通過(guò)篩選和驗(yàn)證食管癌患者外周血miRNA標(biāo)記物,預(yù)測(cè)其靶基因,并檢測(cè)相應(yīng)的mRNA及蛋白質(zhì)在食管癌患者中的表達(dá)水平的改變,探討其異常表達(dá)與食管癌可能的關(guān)系。方法:以食管癌患者外周血為資源,以健康群體為對(duì)照,依托miRNA芯片技術(shù)平臺(tái),通過(guò)對(duì)外周血白細(xì)胞miRNA譜分析及候選指標(biāo)的篩選,并以實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)單一候選miRNA進(jìn)行大樣本驗(yàn)證,確定食管癌患者外周血白細(xì)胞中差異表達(dá)的miRNA標(biāo)記物,利用TargetScan、miRDB、PicTar等靶基因預(yù)測(cè)軟件在線預(yù)測(cè)miRNA可能的靶基因,同時(shí)利用Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)其靶基因功能進(jìn)行檢索,篩選出與腫瘤、免疫、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化相關(guān)的靶基因,并應(yīng)用RT-qPCR、蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè)其表達(dá)水平的變化。結(jié)果:芯片結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較,食管癌組上調(diào)表達(dá)miRNA為184種,下調(diào)表達(dá)miRNA為143種。根據(jù)miRNA表達(dá)差異倍數(shù)、P值等數(shù)據(jù),選出其中12種候選miRNA,在32例食管癌、27例健康志愿者標(biāo)本中,應(yīng)用RT-qPCR對(duì)候選miRNA表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較發(fā)...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
研究?jī)?nèi)容與方法
1.實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
    1.2 主要儀器設(shè)備
    1.3 主要試劑
    1.4 Western Blot主要試劑的配制
2.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)流程圖
    2.2 標(biāo)本的收集
    2.3 miRNA提取質(zhì)檢過(guò)程
    2.4 miRNA譜芯片檢測(cè)過(guò)程
    2.5 引物設(shè)計(jì)
    2.6 RT-qPCR分析
    2.7 miRNA的靶基因預(yù)測(cè)
    2.8 靶基因引物設(shè)計(jì)
    2.9 靶基因mRNA表達(dá)的檢測(cè)
3.Western Blot檢測(cè)靶基因蛋白水平的表達(dá)
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
討論
小結(jié)
問(wèn)題與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
導(dǎo)師評(píng)閱表



本文編號(hào)：3805070