隨著基因組學(xué)的快速發(fā)展,大量未知功能基因的測序數(shù)據(jù)引起了廣泛關(guān)注,許多生物全基因組的成功破譯,其基因組學(xué)的研究也有了質(zhì)的突破,故水稻的這些未知功能基因被視為其基因藍(lán)圖中不可或缺的部分。目前,在所有真核生物基因組序列中大約有20%-40%編碼蛋白的基因?qū)儆谖粗δ芑�。為了深入了解水稻的逆境反�?yīng)機(jī)制及發(fā)現(xiàn)新的水稻逆境應(yīng)答基因,我們利用水稻基因芯片Affymetrix(含51279個(gè)轉(zhuǎn)錄本)分析了水稻秈稻栽培種培矮64S在逆境脅迫下,不同時(shí)期中不同器官的表達(dá)譜。在眾多逆境響應(yīng)基因中篩選了一個(gè)感興趣的基因作為候選基因,因其無明顯結(jié)構(gòu)特征,也無相關(guān)報(bào)道,所以將其命名為未知功能基因OsUF3(Oryza sativa unknown function)。GEO表達(dá)數(shù)據(jù)分析顯示OsUF3主要受干旱和低溫誘導(dǎo)。因此,推測該基因?yàn)橐粋�(gè)新的逆境應(yīng)答基因。為了進(jìn)一步驗(yàn)證OsUF3基因在逆境脅迫中的功能,我們分別構(gòu)建了過表達(dá)載體D-163+1300:OsUF3、反義抑制表達(dá)載體D-163+1300:OsUF3、GFP載體D-163+1300:OsUF3-GFP及啟動子雙元表達(dá)載體p CAMBIA3301:O...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文章綜述
    1.1 幾種常見的非生物脅迫
    1.2 植物體內(nèi)非生物脅迫下的應(yīng)答和調(diào)節(jié)途徑
        1.2.1 植物體內(nèi)非生物脅迫信號傳遞的一般途徑
        1.2.2 非生物脅迫信號在植物體內(nèi)傳遞的信號分子
        1.2.3 植物中響應(yīng)非生物脅迫信號的轉(zhuǎn)錄因子
    1.3 植物基因功能研究的主要方法
        1.3.1 插入突變
        1.3.2 RNA干擾
        1.3.3 共抑制
        1.3.4 人工植物染色體（plant artificial chromosome, PLAC）
        1.3.5 微陣列(Microarray)
        1.3.6 酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid system）
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 水稻多逆境誘導(dǎo)基因OsUF3的克隆及表達(dá)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料、菌株和載體
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要培養(yǎng)基
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 材料處理與基因芯片分析
        2.2.2 熒光定量qRT-PCR分析
        2.2.3 OsUF3基因的克隆
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 基因芯片結(jié)果
        2.3.2 OsUF3基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析
        2.3.3 OsUF3基因的克隆
        2.3.4 OsUF3基因序列分析
第三章 OsUF3植物表達(dá)載體的構(gòu)建、遺傳轉(zhuǎn)化及陽性植株的鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料、菌株及載體
        3.1.2 主要試劑及培養(yǎng)基
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 過表達(dá)載體及反義表達(dá)載體D-163+1300:OsUF3的構(gòu)建
        3.2.2 D-163+1300:OsUF3-GFP表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.3 OsUF3基因啟動子重組載體的構(gòu)建
        3.2.4 OsUF3基因相關(guān)載體的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.5 水稻轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        3.2.7 OsUF3亞細(xì)胞定位分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 過表達(dá)載體及反義載體D-163+1300:OsUF3的構(gòu)建
        3.3.2 GFP載體D-163+1300-OsUF3-GFP的構(gòu)建
        3.3.3 啟動子重組載體pCAMBIA3301-OsUF3-P的構(gòu)建
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因水稻的獲得
        3.3.5 T0代轉(zhuǎn)基因水稻的檢測
        3.3.6 OsUF3的亞細(xì)胞定位
        3.3.7 OsUF3表達(dá)量的檢測
第四章 OsUF3轉(zhuǎn)基因水稻的非生物脅迫和植物激素處理結(jié)果與分析及農(nóng)藝性狀的初步測定
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 主要試劑及培養(yǎng)基
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 種子的萌發(fā)
        4.2.2 OsUF3基因GUS活性檢測
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 OsUF3的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻對非生物脅迫和植物激素的響應(yīng)
        4.3.2 通過GUS活性檢測初步判斷OsUF3啟動子對逆境的應(yīng)答
        4.3.3 OsUF3轉(zhuǎn)基因水稻農(nóng)藝性狀的初步測定
第五章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
    5.2 不足與展望
    5.3 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3803875