CRISPR/Cas9系統(tǒng)是在細(xì)菌和古細(xì)菌體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種獲得性免疫機(jī)制,通過嵌合的雙鏈RNA介導(dǎo)的Cas9蛋白對(duì)靶基因進(jìn)行基因組編輯,從而沉默靶基因的表達(dá)。通過不斷改進(jìn),將該系統(tǒng)用于基因敲除具有效率高、周期短、操作簡單、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn),已經(jīng)成功應(yīng)用于多種模式昆蟲(包括果蠅、家蠶等)的基因組編輯中,但在非模式昆蟲中應(yīng)用很少,更未見有在嗅覺基因功能研究中的應(yīng)用。斜紋夜蛾Spodoptera litura屬夜蛾科,是一種世界性分布的重要農(nóng)業(yè)害蟲。普通氣味結(jié)合蛋白(General odorant binding protein,GOBP)高濃度存在于嗅覺感器的液腔內(nèi),負(fù)責(zé)將進(jìn)入感器內(nèi)的脂溶性寄主植物氣味結(jié)合并運(yùn)輸?shù)叫嵊X神經(jīng)樹突表面的受體(Olfactory recetptor,OR)部位,但受技術(shù)所限其生理功能一直缺乏活體研究的直接證據(jù)。本研究探討了 CRISPR/Cas9技術(shù)在斜紋夜蛾GOBP2基因敲除中的應(yīng)用,獲得了多種不同類型的突變嵌合體,并經(jīng)篩選得到1個(gè)GOBP2基因缺失了 3個(gè)堿基并插入6個(gè)堿基的斜紋夜蛾突變品系。利用觸角電位儀(Electroantennography,EAG)進(jìn)行電生...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 CRISPR/CAs系統(tǒng)的基本介紹
        1.1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        1.2 CRISPR/Cas的結(jié)構(gòu)組成
        1.3 CRISPR/Cas的分類
    2 CRISPR/CAs9系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        2.1 CRISPR/Cas9的發(fā)現(xiàn)
        2.2 CRISPR/Cas9系統(tǒng)在基因編輯中的應(yīng)用
        2.3 CRISPR/Cas9系統(tǒng)基因編輯的機(jī)制
        2.4 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的脫靶效應(yīng)
    3 昆蟲的嗅覺感器及嗅覺感受機(jī)制
    4 昆蟲普通氣味結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展
    5 斜紋夜蛾及其發(fā)生,危害和防治的研究
        5.1 斜紋夜蛾的生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特征
        5.2 斜紋夜蛾的為害特征
        5.3 斜紋夜蛾的防治
    6 本研究的目的和意義
第二章 利用CRISPR/CAS9系統(tǒng)敲除斜紋夜蛾GOBP2基因
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 靶標(biāo)位點(diǎn)的選擇及sgRNA和Cas9 mRNA的合成
        2.2 卵的注射及突變檢測(cè)
        2.3 突變單對(duì)系的篩選
        2.4 脫靶效應(yīng)的檢測(cè)
    3 討論
第三章 SlitGOBP2突變個(gè)體觸角電位反應(yīng)的測(cè)定
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 測(cè)試個(gè)體的基因型檢測(cè)
        2.2 觸角電位反應(yīng)
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄:攻讀碩士學(xué)位期間學(xué)術(shù)論文的發(fā)表情況
致謝



本文編號(hào)：3801820