發(fā)布時間：2023-04-24 23:57

　　RPS6KA2(ribosomal protein S6 kinase,90kDa,polypeptide 2,RSK3)基因是編碼絲氨酸和蘇氨酸激酶的RSK(核糖體S6激酶)家族的成員。RPS6KA2激酶含有2個不相同的激酶催化結構域,通過磷酸化不同底物參與細胞生長和細胞分化等多種生理生化活動。本實驗室以前的研究結果顯示,細絲蛋白A(Filamin A,FLNA)對RNA聚合酶Ⅰ(PolⅠ)和RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)所指導的基因轉錄具有抑制作用,但其調(diào)節(jié)機制還不完全清楚。最近mRNA-seq分析表明,在FLNA敲低的SaOS2細胞中RPS6KA2 mRNA表達量顯著提高。通過檢測不同細胞的FLNA shRNA穩(wěn)定表達細胞系,進一步確定FLNA能抑制RPS6KA2的表達。以前的研究表明,Ras和ERK參與Pol Ⅰ和Ⅲ介導的基因表達,而RPS6KA2是ERK信號通路中效應子之一.這些信息提示RPS6KA2可能參與PolⅠ和Pol Ⅲ所指導的基因轉錄調(diào)節(jié)。為了研究RPS6KA2是否參與了PolⅠ和Pol Ⅲ指導的基因轉錄,我們通過基因克隆的方法制備了RPS6KA2 shRNA表達載體并...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究意義
    1.2 研究背景與現(xiàn)狀
        1.2.1 細絲蛋白A(FLNA)
        1.2.2 p90 核糖體S6 蛋白激酶家族(RSKs)
        1.2.3 RNA聚合酶Ⅰ(polⅠ)和RNA聚合酶Ⅲ(polⅢ)基因轉錄
    1.3 本課題產(chǎn)生的依據(jù)和研究目標
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗所需的細胞和質(zhì)粒
        2.1.2 實驗耗材
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗儀器及設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 質(zhì)粒構建
        2.2.2 細胞操作實驗
        2.2.3 RT-qPCR(實時熒光定量PCR)
        2.2.4 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,WB)
        2.2.5 細胞增殖實驗
    2.3 實驗數(shù)據(jù)處理
第3章 實驗結果
    3.1 細胞內(nèi)FLNA的敲低可增強RPS6KA2 的表達
    3.2 RPS6KA2 SHRNA瞬時敲低能夠抑制POLⅠ和POLⅢ指導的基因轉錄
    3.3 建立RPS6KA2 SHRNA穩(wěn)定表達細胞系
    3.4 RPS6KA2在POLⅠ和POLⅢ基因轉錄中起促進作用
    3.5 RPS6KA2 瞬時過表達顯著增強部分POLⅠ和POLⅢ基因轉錄的表達
    3.6 RPS6KA2 穩(wěn)定過表達細胞系的建立及POLⅠ和POLⅢ基因轉錄的調(diào)節(jié)
    3.7 敲低RPS6KA2能抑制細胞的增殖
    3.8 RPS6KA2過表達能促進細胞的增殖
    3.9 RPS6KA2 通過影響RHOA和C-MYC的表達調(diào)節(jié)POLⅠ和POLⅢ指導的基因轉錄
第4章 結論與展望
    4.1 結論
    4.2 展望
致謝
參考文獻
附錄1 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學位期間參加的科研項目



本文編號：3800285