RPS6KA2(ribosomal protein S6 kinase,90kDa,polypeptide 2,RSK3)基因是編碼絲氨酸和蘇氨酸激酶的RSK(核糖體S6激酶)家族的成員。RPS6KA2激酶含有2個(gè)不相同的激酶催化結(jié)構(gòu)域,通過(guò)磷酸化不同底物參與細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞分化等多種生理生化活動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)室以前的研究結(jié)果顯示,細(xì)絲蛋白A(Filamin A,FLNA)對(duì)RNA聚合酶Ⅰ(PolⅠ)和RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)所指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄具有抑制作用,但其調(diào)節(jié)機(jī)制還不完全清楚。最近mRNA-seq分析表明,在FLNA敲低的SaOS2細(xì)胞中RPS6KA2 mRNA表達(dá)量顯著提高。通過(guò)檢測(cè)不同細(xì)胞的FLNA shRNA穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,進(jìn)一步確定FLNA能抑制RPS6KA2的表達(dá)。以前的研究表明,Ras和ERK參與Pol Ⅰ和Ⅲ介導(dǎo)的基因表達(dá),而RPS6KA2是ERK信號(hào)通路中效應(yīng)子之一.這些信息提示RPS6KA2可能參與PolⅠ和Pol Ⅲ所指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。為了研究RPS6KA2是否參與了PolⅠ和Pol Ⅲ指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄,我們通過(guò)基因克隆的方法制備了RPS6KA2 shRNA表達(dá)載體并...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究意義
    1.2 研究背景與現(xiàn)狀
        1.2.1 細(xì)絲蛋白A(FLNA)
        1.2.2 p90 核糖體S6 蛋白激酶家族(RSKs)
        1.2.3 RNA聚合酶Ⅰ(polⅠ)和RNA聚合酶Ⅲ(polⅢ)基因轉(zhuǎn)錄
    1.3 本課題產(chǎn)生的依據(jù)和研究目標(biāo)
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 細(xì)胞操作實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 RT-qPCR(實(shí)時(shí)熒光定量PCR)
        2.2.4 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,WB)
        2.2.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 細(xì)胞內(nèi)FLNA的敲低可增強(qiáng)RPS6KA2 的表達(dá)
    3.2 RPS6KA2 SHRNA瞬時(shí)敲低能夠抑制POLⅠ和POLⅢ指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄
    3.3 建立RPS6KA2 SHRNA穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系
    3.4 RPS6KA2在POLⅠ和POLⅢ基因轉(zhuǎn)錄中起促進(jìn)作用
    3.5 RPS6KA2 瞬時(shí)過(guò)表達(dá)顯著增強(qiáng)部分POLⅠ和POLⅢ基因轉(zhuǎn)錄的表達(dá)
    3.6 RPS6KA2 穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞系的建立及POLⅠ和POLⅢ基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)
    3.7 敲低RPS6KA2能抑制細(xì)胞的增殖
    3.8 RPS6KA2過(guò)表達(dá)能促進(jìn)細(xì)胞的增殖
    3.9 RPS6KA2 通過(guò)影響RHOA和C-MYC的表達(dá)調(diào)節(jié)POLⅠ和POLⅢ指導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄
第4章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目



本文編號(hào)：3800285