玉米是全球最重要的糧食和飼料作物之一,玉米籽粒的品質(zhì)和產(chǎn)量直接決定了玉米的應(yīng)用價值。對玉米籽粒的研究有助于為提高玉米產(chǎn)量、改善玉米品質(zhì)提供理論基礎(chǔ)。玉米籽粒突變體為玉米籽粒的研究提供了良好的材料。1764突變體屬于玉米籽粒發(fā)育缺陷型(defective kernel,dek)突變。該突變體成熟籽粒皺縮,胚乳填充不充分,胚發(fā)育嚴重缺陷,致死,不能萌發(fā)。相較于同時期的野生型,未成熟籽粒石蠟切片觀察表明,突變體胚的發(fā)育嚴重受到影響,幾乎不發(fā)育。未成熟籽粒的透射電鏡分析表明,突變體胚乳細胞填充物不足,尤其是蛋白體的體積變小、數(shù)量減少。成熟籽粒的生化成分分析進一步說明,突變體籽粒中醇溶蛋白和非醇溶蛋白含量均顯著下降,其中19 kDa和27 kDa醇溶蛋白的含量下降尤其顯著。而突變體籽粒中淀粉的含量略有上升。本研究利用圖位克隆的方法,將1764基因定位在8號染色體4.705933 M到5.212037 M之間。定位區(qū)間內(nèi)有14個基因,通過測序分析已經(jīng)排除了其中12個基因,另外2個基因仍然在分析確認之中。1763突變體同樣屬于玉米籽粒發(fā)育缺陷的dek突變體。該突變體成熟籽粒明顯皺縮、空癟,但種子仍可...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言與綜述
    1.1 玉米簡介
    1.2 玉米籽粒結(jié)構(gòu)及發(fā)育
    1.3 玉米籽粒營養(yǎng)儲存
        1.3.1 胚乳淀粉
        1.3.2 胚乳蛋白
    1.4 玉米籽粒突變體
    1.5 圖位克隆技術(shù)
    1.6 課題研究的意義
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料與試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 主要試劑與儀器
        2.1.3 常用試劑配方
    2.2 實驗方法
        2.2.1 1764 突變體的表型分析
            2.2.1.1 1764 突變體成熟籽粒的表型
            2.2.1.2 百粒重分析
        2.2.2 TPS法抽提玉米籽�；蚪M
        2.2.3 CTAB法抽提DNA
        2.2.4 PCR體系與反應(yīng)條件
        2.2.5 RNA的抽提與反轉(zhuǎn)錄
        2.2.6 實時定量PCR反應(yīng)
        2.2.7 未成熟籽粒石蠟切片制作與觀察
        2.2.8 透射電鏡觀察
        2.2.9 Brandford法蛋白定量
        2.2.10 籽粒胚乳淀粉含量的測定方法
        2.2.11 Western Blot(SDS-PAGE)
        2.2.12 醇溶蛋白及非醇溶蛋白抽提
        2.2.13 蒽酮法測定未成熟玉米籽粒胚乳可溶性糖
        2.2.14 硼酸鈉法抽提玉米籽粒蛋白
        2.2.15 轉(zhuǎn)錄組測序
第三章 1764 突變體的精細定位
    3.1 實驗結(jié)果
        3.1.1 1764 突變體的表型分析
        3.1.2 1764 突變體的百粒重及淀粉含量分析
        3.1.3 1764 突變體的蛋白含量分析
        3.1.4 1764 突變體的石蠟切片觀察
        3.1.5 1764 突變體的透射電鏡觀察
        3.1.6 1764 突變體基因的染色體定位
        3.1.7 1764 突變體基因的粗定位
        3.1.8 1764 突變體基因的精細定位
        3.1.9 1764 突變體候選區(qū)間內(nèi)的基因
        3.1.10 1764 突變體轉(zhuǎn)錄組中差異基因的GO分析
    3.2 小結(jié)與討論
        3.2.1 1764 突變體的表型
        3.2.2 1764 突變體的候選基因
第四章 1763 突變體基因的克隆和初步功能分析
    4.1 實驗結(jié)果
        4.1.1 1763 突變體的候選基因的克隆
        4.1.2 1763 突變體的淀粉及可溶性糖含量分析
        4.1.3 1763 突變體的候選基因的轉(zhuǎn)錄本表達及啟動子分析
        4.1.4 1763 突變體的候選基因的蛋白水平的檢測
        4.1.5 1763 突變體轉(zhuǎn)錄組中差異基因的GO分析
    4.3 小結(jié)與討論
        4.3.1 1763 突變體的轉(zhuǎn)錄本表達
        4.3.2 1763 突變體的驗證
        4.3.3 1763 突變體中胚及胚乳物質(zhì)積累的相互影響
參考文獻
附錄
作者在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的成果
致謝



本文編號：3796655