發(fā)布時間：2023-04-02 13:55

　　大賴草(Leymus racemosus(Lam.)Tzvel)是禾本科(Poaceae)小麥族(Triticeae)多年生四倍體草本物種。具有密集的生殖結(jié)構(gòu)和極強的無性繁殖能力,生長于沙丘或沙質(zhì)草地,是一種優(yōu)良的固沙植物。作為珍貴野生植物資源,其抗干旱、抗鹽堿、抗病蟲害等優(yōu)良基因成為眾多學者的研究熱點。大賴草抗逆性與其木質(zhì)素的生物合成有密切的關(guān)系,但影響大賴草抗逆性和木質(zhì)素及合成途徑相關(guān)基因的研究鮮有報道。本研究通過分子克隆得到木質(zhì)素合成途徑的相關(guān)基因、并借助系統(tǒng)發(fā)育樹對其進行親緣關(guān)系分析;通過基因表達和酶活性監(jiān)測對大賴草木質(zhì)素生物合成途徑的代謝規(guī)律進行研究,探討了大賴草木質(zhì)素生物合成途徑關(guān)鍵基因和酶活性對木質(zhì)素積累的影響。主要結(jié)果如下:1、經(jīng)過同源基因序列比對,簡并擴增克隆得到了大賴草4-香豆酸Co A連接酶(4CL)、香豆酸-3-羥化酶(C3H)、肉桂酸-4-羥化酶(C4H)、阿魏酸-5-羥化酶(F5H)和苯丙氨酸氨基裂解酶(PAL)五個基因的保守序列。結(jié)合RACE首次得到其PAL基因的全長c DNA序列。PAL基因ORF為2121 bp,編碼697個氨基酸,蛋白質(zhì)大小為75.9...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 賴草屬
    1.2 大賴草
    1.3 木質(zhì)素
    1.4 木質(zhì)素的生物合成途徑
        1.4.1 苯丙氨酸氨基裂解酶
        1.4.2 羥基化酶
        1.4.3 甲基化酶
        1.4.4 連接酶
        1.4.5 聚合酶
        1.4.6 木質(zhì)素生物合成特異途徑的還原酶
    1.5 木質(zhì)素合成途徑的調(diào)控
    1.6 主要的技術(shù)手段與研究目的
        1.6.1 cDNA末端快速擴增
        1.6.2 熒光定量PCR
        1.6.3 立題依據(jù)
        1.6.4 技術(shù)路線
2 材料和方法
    2.1 實驗材料
    2.2 樣品的采集及處理
    2.3 大賴草木質(zhì)素生物合成相關(guān)基因的克隆
        2.3.1 RNA提取
        2.3.2 RNA電泳檢測
        2.3.3 反轉(zhuǎn)錄PCR
        2.3.4 保守序列克隆
        2.3.5 連接轉(zhuǎn)化及陽性克隆的篩選和鑒定
        2.3.6 大賴草苯丙氨酸氨基裂解酶基因c DNA全長克隆及分析
        2.3.7 cDNA3’端快速擴增(3’RACE)
        2.3.8 cDNA5’端快速擴增(5’RACE)
        2.3.9 拼接全長
    2.4 實時熒光定量PCR
    2.5 酸不溶性木質(zhì)素含量的測定
    2.6 過氧化物酶(POD)活性的測定
3 結(jié)果分析
    3.1 大賴草木質(zhì)素合成相關(guān)基因的克隆及序列分析
        3.1.1 RNA的質(zhì)量分析
        3.1.2 大賴草木質(zhì)素合成相關(guān)基因序列信息
        3.1.3 大賴草木質(zhì)素合成基因PAL全長克隆
    3.2 大賴草木質(zhì)素合成相關(guān)基因的表達及其與木質(zhì)素積累的關(guān)系
        3.2.1 RNA完整性和純度檢測
        3.2.2 實時熒光定量PCR的融解曲線
        3.2.3 擴增效率
        3.2.4 目的基因年周期的相對表達量
        3.2.5 酸不溶性木質(zhì)素年周期的變化
        3.2.6 大賴草木質(zhì)素合成相關(guān)基因的表達及其與木質(zhì)素積累的關(guān)系
    3.3 大賴草木質(zhì)素積累與過氧化物酶活性的關(guān)系
        3.3.1 過氧化物酶年周期的變化
        3.3.2 大賴草年生長發(fā)育周期木質(zhì)素的積累與過氧化物酶活性的關(guān)系
4 討論
    4.1 大賴草木質(zhì)素合成途徑相關(guān)基因的克隆
    4.2 大賴草木質(zhì)素合成途徑相關(guān)基因的表達與木質(zhì)素積累的關(guān)系
    4.3 大賴草過氧化物酶活性與木質(zhì)素積累的關(guān)系
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄
作者簡歷



本文編號：3779344