人參皂苷(Ginsenosides)屬于三萜皂苷類化合物,是人參屬植物中最主要的活性成分,具有抗腫瘤、抗氧化以及調(diào)節(jié)免疫力等多種藥理作用。人參皂苷Rd是原人參二醇型皂苷在人體腸道內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物之一,對(duì)心腦血管、神經(jīng)以及免疫系統(tǒng)具有獨(dú)特的藥效功能;同時(shí)人參皂苷Rd還是轉(zhuǎn)化Rb1、Rb₂、Rb3和Rc為高活性稀有人參皂苷C-K的中間體。由于人參皂苷Rd在人參屬植物中含量較低,通過(guò)直接從植物中提取Rd的方法難以滿足其實(shí)際應(yīng)用。利用特定的糖苷水解酶可以水解人參皂苷主要成分(如:人參皂苷Rb1、Rb₂、Rb3、Rc)C-20位外側(cè)糖基獲得人參皂苷Rd。本論文從實(shí)驗(yàn)室前期分離獲得的一株纖維菌屬(Cellulosimicrobium aquatile Lyp51)中克隆到一個(gè)α-L-阿拉伯咲喃糖苷酶(EC3.2.1.55)基因和一個(gè)雙功能β-木糖苷酶(3.2.1.37)/α-L-阿拉伯吡喃糖苷酶基因,在Escherichiacoli BL211(DE3)中進(jìn)行異源重組表達(dá)、并對(duì)重組蛋白進(jìn)行了純化、酶學(xué)性質(zhì)研究和人參皂苷轉(zhuǎn)化。利用Ni²⁺

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1 課題研究的目的與意義
        1.1 原人參二醇型皂苷
        1.2 人參皂苷Rd的藥理活性與生物轉(zhuǎn)化
        1.3 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶研究進(jìn)展
        1.4 雙功能β-木糖苷酶/α-L-阿拉伯吡喃糖苷酶研究進(jìn)展
        1.5 融合蛋白研究概述
        1.6 重疊延伸PCR技術(shù)簡(jiǎn)介
    2 研究思路
        2.1 本研究技術(shù)路線
        2.2 本課題研究?jī)?nèi)容
第二章 糖苷水解酶基因的克隆表達(dá)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)菌株與質(zhì)粒
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 目的基因克隆
        2.2 目的基因的表達(dá)與純化
        2.3 蛋白濃度檢測(cè)
        2.4 酶活性檢測(cè)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(CaAraf51)的克隆表達(dá)
        3.2 雙功能β-木糖苷酶/α-L-阿拉伯吡喃糖苷酶(Xylarap51)基因的克隆表達(dá)
第三章 重組酶的酶學(xué)性質(zhì)研究及應(yīng)用
    1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器、試劑
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 酶的最適pH和pH穩(wěn)定性
        2.2 酶最適溫度與溫度穩(wěn)定性
        2.3 化學(xué)試劑與金屬離子對(duì)酶活性影響
        2.4 酶對(duì)乙醇以及糖的耐受性
        2.5 酶的底物特異性
        2.6 酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)K_m和V_max的測(cè)定
        2.7 人參皂苷Rd的分析方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 重組CaAraf51的特性
        3.2 Xylarap51的底物特異性
第四章 融合表達(dá)
    1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 重組質(zhì)粒的提取
        2.2 帶有同源片段的目的基因擴(kuò)增
        2.3 融合基因的構(gòu)建與克隆
        2.4 融合基因的表達(dá)
        2.5 融合蛋白酶活性檢測(cè)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 融合基因
        3.2 融合基因的克隆
        3.3 融合基因的表達(dá)
        3.4 融合蛋白活性檢測(cè)
        3.5 結(jié)論
第五章 結(jié)論與展望
    1 總結(jié)
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
    3 展望
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3779737