研究目的:難治性腎病綜合征(RNS)的表現(xiàn)為激素抵抗、激素依賴或反復(fù)復(fù)發(fā),其預(yù)后差,易發(fā)展為終末期腎病(ESRD)。RNS發(fā)病機(jī)制還不完全清楚,目前認(rèn)為多種因素均可導(dǎo)致其發(fā)生,其中遺傳因素在難治性腎病綜合征(RNS)的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。我們前期在局灶節(jié)段性腎小球硬化癥(FSGS)家系中發(fā)現(xiàn)一個(gè)FSGS新的候選致病基因—ARHGAP32基因(c.1213C>G,p.Leu405Val)雜合突變,可能是該家系FSGS的發(fā)病原因。本項(xiàng)目是在此基礎(chǔ)上,通過(guò)體內(nèi)外研究,初步探討ARHGAP32表達(dá)變化及突變導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的機(jī)制,為RNS發(fā)病機(jī)制研究及新的治療措施提供新思路。同時(shí)繼續(xù)對(duì)RNS患者進(jìn)行致病基因篩查和驗(yàn)證,期望檢測(cè)出與RNS相關(guān)的變異,以利于臨床診斷、治療和預(yù)后。研究方法:(1)通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)對(duì)ARHGAP32基因突變進(jìn)行功能研究,研究其蛋白表達(dá)水平;構(gòu)建Arhgap32基因點(diǎn)突變小鼠后,尾靜脈注射阿霉素建立Arhgap32基因L405V點(diǎn)突變小鼠的腎臟損傷模型,收集其尿液、血液及腎組織標(biāo)本,檢測(cè)相關(guān)生化指標(biāo)和病理分析;檢測(cè)足細(xì)胞的標(biāo)志物Nephrin和Synaptopod...

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 難治性腎病綜合征容易發(fā)展至終末期腎病
    1.2 遺傳變異在難治性腎病綜合征發(fā)病中起重要作用
    1.3 遺傳變異也在中國(guó)難治性腎病綜合征發(fā)病中起重要作用
    1.4 ARHGAP32 可能是難治性腎病綜合征的候選致病基因
    1.5 ARHGAP32 基因突變可能影響足細(xì)胞的細(xì)胞骨架
    1.6 本文主要工作
    1.7 本論文的結(jié)構(gòu)安排
第二章 ARHGAP32 基因突變?cè)隗w內(nèi)外的功能研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
            2.1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器耗材
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.2.1 Arhgap32基因點(diǎn)突變小鼠模型建立及鼠尾基因型鑒定
            2.1.2.2 動(dòng)物阿霉素?fù)p傷模型建立及分組
            2.1.2.3 尿液和血液相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)
            2.1.2.4 腎組織RNA提取
            2.1.2.5 RNA逆轉(zhuǎn)錄
            2.1.2.6 qPCR
            2.1.2.7 石蠟切片
            2.1.2.8 常規(guī)病理染色
            2.1.2.9 免疫組織化學(xué)染色
            2.1.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 Arhgap32基因點(diǎn)突變小鼠模型建立
        2.2.2 建立Arhgap32 基因點(diǎn)突變小鼠阿霉素腎損傷模型
        2.2.3 Arhgap32 蛋白在小鼠腎組織中的表達(dá)
        2.2.4 ARHGAP32 基因突變通過(guò)影響足細(xì)胞引起腎臟損傷
        2.2.5 ARHGAP32 基因突變引起足細(xì)胞損傷機(jī)制
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
第三章 難治性腎病綜合征患者的突變篩查
    3.1 材料與方法
        3.1.1 研究對(duì)象
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1.2.1 對(duì)上述患者外周血DNA進(jìn)行全外顯子測(cè)序
            3.1.2.2 生物信息學(xué)分析篩查可能存在的致病基因突變
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 臨床特征和實(shí)驗(yàn)室檢查
        3.2.2 基因分析
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
第四章 全文總結(jié)
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 后續(xù)工作展望
致謝
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3779155