【目的】暴馬桑黃是一種重要的藥用資源,三萜是其發(fā)揮藥用功效的主要成分,但是目前獲取大量三萜仍然非常困難。通過對暴馬桑黃三萜合成途徑中的羊毛甾醇14α-脫甲基酶(lanosterol 14-alpha-demethylase,LSD)基因進(jìn)行克隆及差異表達(dá)分析,以期深入了解暴馬桑黃三萜合成的調(diào)控機(jī)理,進(jìn)而提高三萜產(chǎn)量�！痉椒ā坎捎肞CR擴(kuò)增得到LSD基因cDNA序列全長,利用生物信息學(xué)軟件對該基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行分析;采取同源重組方法構(gòu)建原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)后誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE檢測;qRT-PCR技術(shù)分析LSD基因在暴馬桑黃不同發(fā)育階段轉(zhuǎn)錄水平差異。【結(jié)果】暴馬桑黃LSD基因cDNA全長1 662 bp,編碼553個氨基酸,相對分子量為62.26 kDa,命名為SbLSD(登錄號為MN864180);跨膜區(qū)和亞細(xì)胞定位預(yù)測顯示SbLSD蛋白是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體發(fā)揮作用的跨膜蛋白;系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果表明暴馬桑黃和靈芝的LSD蛋白同源性最高,符合物種經(jīng)典分類;SDS-PAGE結(jié)果證實(shí)在62.26 kDa附近出現(xiàn)目的蛋白條帶,說明所獲得的基因可以成功表達(dá)出蛋白;...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 試驗(yàn)引物
        1.2.2 Sb LSD基因克隆
        1.2.3 Sb LSD基因序列分析
        1.2.4 Sb LSD基因原核表達(dá)載體構(gòu)建
        1.2.5 Sb LSD基因誘導(dǎo)表達(dá)及檢測
        1.2.6 Sb LSD基因熒光定量檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 Sb LSD基因克隆
    2.2 Sb LSD基因生物信息學(xué)分析
        2.2.1 Sb LSD蛋白理化性質(zhì)預(yù)測
        2.2.2 Sb LSD蛋白跨膜區(qū)預(yù)測
        2.2.3 Sb LSD蛋白信號肽預(yù)測
        2.2.4 Sb LSD蛋白磷酸化位點(diǎn)預(yù)測
        2.2.5 Sb LSD蛋白亞細(xì)胞定位預(yù)測
        2.2.6 Sb LSD蛋白高級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.2.7 Sb LSD蛋白同源性分析
    2.3 重組質(zhì)粒的獲得
    2.4 Sb LSD基因原核表達(dá)
    2.5 Sb LSD基因在不同發(fā)育階段轉(zhuǎn)錄水平變化
3 結(jié)論與討論
    3.1 討論
    3.2 結(jié)論



本文編號：3779033