我國(guó)是家豬養(yǎng)殖和消費(fèi)大國(guó),提高母豬的繁殖力對(duì)于促進(jìn)我國(guó)生豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的作用。排卵率和產(chǎn)仔數(shù)是影響家畜繁殖力的關(guān)鍵因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鑒定是控制綿羊排卵數(shù)和多胎性狀的一個(gè)主效基因,然而目前在家豬BMP15基因中尚未發(fā)現(xiàn)類似綿羊多胎品系的天然突變�；诟叩炔溉閯�(dòng)物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因組編輯技術(shù)對(duì)動(dòng)物基因組定點(diǎn)修飾的高效性,應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)對(duì)家豬BMP15基因進(jìn)行精確的遺傳修飾,使家豬獲得類似多胎綿羊的天然突變,對(duì)于研究該基因?qū)邑i繁殖力的影響以及培育高繁殖力家豬新品系具有重要的意義。本研究通過(guò)CRISPR/Cas9對(duì)長(zhǎng)白豬胎兒成纖維(porcine embryonic fibroblasts,PEF)細(xì)胞中BMP15基因進(jìn)行打靶,T7E1分析顯示打靶效率僅有5%。隨后通過(guò)共轉(zhuǎn)染RGS雙熒光替代性報(bào)告載體...

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 RGS雙熒光替代性報(bào)告載體工作原理
        1.2.2 靶向BMP15基因的CRISPR/Cas9表達(dá)載體構(gòu)建
        1.2.3 篩選BMP15基因編輯細(xì)胞的RGS雙熒光替代性報(bào)告載體的構(gòu)建
        1.2.4 PEF細(xì)胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
        1.2.5 T7E1實(shí)驗(yàn)
2 結(jié)果與分析
    2.1 RGS雙熒光替代性報(bào)告載體轉(zhuǎn)染PEF細(xì)胞
    2.2 CRISPR/Cas9表達(dá)載體與RGS雙熒光替代性報(bào)告載體共轉(zhuǎn)染PEF細(xì)胞
    2.3 T7E1酶切鑒定結(jié)果
3 討論



本文編號(hào)：3757294