楊樹PagD53基因的克隆表達及其與PagD14基因的相互作用的研究
發(fā)布時間:2023-02-14 16:38
楊樹是我國重要的工業(yè)用材和造林綠化樹種,提高楊樹木材的生產(chǎn)力,培育出優(yōu)良品質(zhì)的楊樹品種這一工作尤為重要。光能是植物積累生物量的初級能源,而樹冠是樹木截獲光能、進行光合作用的場所,因此冠型結(jié)構(gòu)和冠層密度是決定林分木材產(chǎn)量的重要因素。楊樹的冠型結(jié)構(gòu)和冠層密度主要由分枝發(fā)育決定。在木本植物中,分枝發(fā)育主要是指側(cè)枝的發(fā)育和調(diào)控,側(cè)枝是由葉腋處的腋芽發(fā)育而來,而側(cè)芽與側(cè)枝的發(fā)育是一個極為復(fù)雜的生理過程,受到植物自身的遺傳性、激素調(diào)節(jié)、生長環(huán)境和營養(yǎng)條件等多種因素的調(diào)控。大量研究表明,植物激素對分枝發(fā)育調(diào)控具有極為重要的作用,已有報道,植物激素獨角金內(nèi)脂(SLs)在植物分枝發(fā)育調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。在擬南芥和水稻的研究中表明獨角金內(nèi)酯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵基因D14可以調(diào)控分枝發(fā)育,D14蛋白編碼了一個水解酶,其可以是感知獨腳金內(nèi)酯的信號,并且具備水解獨腳金內(nèi)酯的能力。在植物中,除了D14蛋白之外,能夠接受獨腳金內(nèi)酯的受體還包括F-box蛋白D3和Clp蛋白酶家族蛋白D53,三者通過相互作用形成復(fù)合體參與獨角金內(nèi)酯的信號調(diào)控。本文以銀腺楊(Populus alba×P.glandulosa)為實驗材...
【文章頁數(shù)】:66 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
1.前言
1.1 林木理想株型
1.2 楊樹的研究進展
1.3 獨腳金內(nèi)酯調(diào)控植物分枝發(fā)育
1.3.1 獨腳金內(nèi)酯的生物合成與信號傳導(dǎo)
1.3.2 獨腳金內(nèi)酯與其他激素共同調(diào)節(jié)植物分枝發(fā)育
1.3.3 參與獨角金內(nèi)酯信號傳導(dǎo)的相關(guān)基因
1.4 D53的生物學(xué)功能
1.4.1 D53的結(jié)構(gòu)
1.4.2 D53的功能
1.5 本研究的目的與意義
1.6 技術(shù)路線
2.試驗材料與方法
2.1 試驗材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌種材料
2.1.3 酶及試劑
2.1.4 主要的儀器設(shè)備
2.2 實驗方法
2.2.1 PagD53 基因克隆與35S::PagD53 過表達載體的構(gòu)建
2.2.2 qRT-PCR檢測84K楊中不同組織的PagD53 基因表達量
2.2.3 PagD53的農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化84K楊
2.2.4 PBI121-PagD53-GFP的表達載體構(gòu)建及煙草亞細胞定位
2.2.5 pGBKT7-PagD14與pGADT7-PagD53 載體的構(gòu)建及酵母雙雜實驗
2.2.6 pSPYNE-PagD14與pSPYCE-PagD53 表達載體的構(gòu)建及煙草熒光雙光子互作實驗
3.結(jié)果與分析
3.1 PagD53基因克隆及生物信息學(xué)分析
3.1.1 PagD53基因克隆
3.1.2 PagD53蛋白的生物信息學(xué)分析
3.1.3 PagD53基因在不同組織部位中的表達分析
3.1.4 35S::PagD53 超表達載體的構(gòu)建與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的84K轉(zhuǎn)化
3.2 PagD53::GFP重組載體的構(gòu)建與本生煙草瞬時轉(zhuǎn)化分析
3.3 pGBKT7-PagD14與pGADT7-PagD53 載體的構(gòu)建及酵母雙雜結(jié)果分析
3.3.1 pGBKT7-PagD14與pGADT7-PagD53 載體的構(gòu)建
3.3.2 自激活檢測
3.3.3 酵母雙雜交檢測
3.4 pSPYNE-PagD14與pSPYCE-PagD53 重組載體的構(gòu)建及煙草熒光雙光子檢測結(jié)果分析
4.討論
4.1 楊樹PagD53 蛋白是含有Clp結(jié)構(gòu)域的功能蛋白
4.2 楊樹PagD53基因表達部位與其對獨腳金內(nèi)酯信號傳導(dǎo)影響的推測
4.3 楊樹PagD53蛋白定位于細胞核內(nèi)
4.4 楊樹PagD53 蛋白與PagD14 蛋白存在相互作用
5.結(jié)論
參考文獻
致謝
本文編號:3742627
【文章頁數(shù)】:66 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
1.前言
1.1 林木理想株型
1.2 楊樹的研究進展
1.3 獨腳金內(nèi)酯調(diào)控植物分枝發(fā)育
1.3.1 獨腳金內(nèi)酯的生物合成與信號傳導(dǎo)
1.3.2 獨腳金內(nèi)酯與其他激素共同調(diào)節(jié)植物分枝發(fā)育
1.3.3 參與獨角金內(nèi)酯信號傳導(dǎo)的相關(guān)基因
1.4 D53的生物學(xué)功能
1.4.1 D53的結(jié)構(gòu)
1.4.2 D53的功能
1.5 本研究的目的與意義
1.6 技術(shù)路線
2.試驗材料與方法
2.1 試驗材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌種材料
2.1.3 酶及試劑
2.1.4 主要的儀器設(shè)備
2.2 實驗方法
2.2.1 PagD53 基因克隆與35S::PagD53 過表達載體的構(gòu)建
2.2.2 qRT-PCR檢測84K楊中不同組織的PagD53 基因表達量
2.2.3 PagD53的農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化84K楊
2.2.4 PBI121-PagD53-GFP的表達載體構(gòu)建及煙草亞細胞定位
2.2.5 pGBKT7-PagD14與pGADT7-PagD53 載體的構(gòu)建及酵母雙雜實驗
2.2.6 pSPYNE-PagD14與pSPYCE-PagD53 表達載體的構(gòu)建及煙草熒光雙光子互作實驗
3.結(jié)果與分析
3.1 PagD53基因克隆及生物信息學(xué)分析
3.1.1 PagD53基因克隆
3.1.2 PagD53蛋白的生物信息學(xué)分析
3.1.3 PagD53基因在不同組織部位中的表達分析
3.1.4 35S::PagD53 超表達載體的構(gòu)建與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的84K轉(zhuǎn)化
3.2 PagD53::GFP重組載體的構(gòu)建與本生煙草瞬時轉(zhuǎn)化分析
3.3 pGBKT7-PagD14與pGADT7-PagD53 載體的構(gòu)建及酵母雙雜結(jié)果分析
3.3.1 pGBKT7-PagD14與pGADT7-PagD53 載體的構(gòu)建
3.3.2 自激活檢測
3.3.3 酵母雙雜交檢測
3.4 pSPYNE-PagD14與pSPYCE-PagD53 重組載體的構(gòu)建及煙草熒光雙光子檢測結(jié)果分析
4.討論
4.1 楊樹PagD53 蛋白是含有Clp結(jié)構(gòu)域的功能蛋白
4.2 楊樹PagD53基因表達部位與其對獨腳金內(nèi)酯信號傳導(dǎo)影響的推測
4.3 楊樹PagD53蛋白定位于細胞核內(nèi)
4.4 楊樹PagD53 蛋白與PagD14 蛋白存在相互作用
5.結(jié)論
參考文獻
致謝
本文編號:3742627
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