目的乳腺癌的發(fā)生發(fā)展受到多種多樣因素的影響,且發(fā)病率逐年提高,是目前全球女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤。乳腺癌的治療方式仍較為傳統(tǒng)和單一,目前分子靶向治療成為臨床研究熱點(diǎn),但是乳腺癌相關(guān)生物標(biāo)志分子和分子靶點(diǎn)仍非常有限。為了篩查出有價(jià)值的乳腺癌相關(guān)因子,對(duì)乳腺癌成對(duì)樣本信息通過(guò)高通量差異表達(dá)基因篩選和生物信息分析,成功篩選出一個(gè)新的對(duì)乳腺癌有重要作用的基因—核糖體合成調(diào)控因子(Regulator of Ribosome Synthesis 1,RRS1)。通過(guò)檢測(cè)RRS1基因在人的乳腺正常上皮細(xì)胞HMEC和乳腺癌細(xì)胞MCF-7中的表達(dá)差異,探討RRS1基因與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性;通過(guò)慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)抑制RRS1的表達(dá)后,分析RRS1對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖活力、細(xì)胞周期分布、凋亡及遷移能力的影響。方法采用Western blot方法檢測(cè)RRS1在人乳腺癌細(xì)胞MCF-7與正常的人乳腺上皮細(xì)胞HMEC中是否存在表達(dá)差異;分別構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白的sh RNA-RRS1慢病毒和sh RNA-Ctrl RNA陰性對(duì)照慢病毒干擾系統(tǒng),分別感染乳腺癌MCF-7細(xì)胞,得到sh RRS1實(shí)...

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        1.1 細(xì)胞株及主要試劑
        1.2 儀器
    2 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與凍存
        2.2 siRNA的序列設(shè)計(jì)
        2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染
        2.4 熒光定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)水平
        2.5 Westernblot檢測(cè)RRS1蛋白表達(dá)水平
        2.6 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力變化
        2.7 細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.8 DAPI熒光法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.9 AnnexinV-APC單染法測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.10 Caspase3/7試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀況
        2.11 Transwell試驗(yàn)測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移
        2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1 MCF-7與HMEC中RRS1蛋白表達(dá)差異檢測(cè)
    2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染水平檢測(cè)
    3 敲減后RRS1基因轉(zhuǎn)錄與翻譯水平檢測(cè)
    4 細(xì)胞增殖能力檢測(cè)
    5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期
    6 熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況
    7 流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    8 caspase3/7試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    9 細(xì)胞遷移能力的變化
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：3742615