葡萄糖氧化酶（GOX）已廣泛應(yīng)用。目前,除了曲霉和青霉屬來源的GOX外,很少有新型GOX被報(bào)道。本研究采用平板顯色的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的真菌進(jìn)行產(chǎn)GOX的篩選,耐寒枝孢菌Cladosporium neopsychrotolerans SL16表達(dá)了GOX活性。根據(jù)其基因組測(cè)序數(shù)據(jù),克隆了GOX編碼基因CngoxA。另外,根據(jù)GOX序列相似性,從枝孢菌C.tianshanense SL19和一株黑曲霉Aspergillus niger MJ5中克隆得到5個(gè)可能的GOX基因,分別為CngoxB、AngoxA5、AngoxA7、AngoxA8和AngoxA3。CngoxA和CngoxB編碼的蛋白與已報(bào)道驗(yàn)證功能的GOX最高一致性為35%,兩者間一致性為80%,均為新穎的GOX。AngoxA5編碼的蛋白與已驗(yàn)證功能的GOX最高一致性為97%,而AngoxA7、AngoxA8和AngoxA3編碼的蛋白與已報(bào)到GOX序列相似性約為50-68%。6個(gè)基因在畢赤酵母Pichia pastoris中進(jìn)行表達(dá),只有CngoxA和AngoxA5表達(dá)了具有葡萄糖氧化酶活性的蛋白。來源于C.neopsychrot... 

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 葡萄糖氧化酶的結(jié)構(gòu)及催化機(jī)理
        1.1.1 葡萄糖氧化酶的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 葡萄糖氧化酶的催化機(jī)理
    1.2 葡萄糖氧化酶的來源、基因克隆與表達(dá)
        1.2.1 來源
        1.2.2 基因克隆與異源表達(dá)
    1.3 葡萄糖氧化酶的理化性質(zhì)
    1.4 葡萄糖氧化酶的分子改良
        1.4.1 葡萄糖氧化酶的固定化研究
        1.4.2 葡萄糖氧化酶的定向進(jìn)化和理性設(shè)計(jì)
    1.5 葡萄糖氧化酶的應(yīng)用前景
        1.5.1 食品工業(yè)
        1.5.2 醫(yī)藥和醫(yī)療業(yè)
        1.5.3 飼料工業(yè)
    1.6 問題與展望
        1.6.1 目前的問題
        1.6.2 展望與對(duì)策
    1.7 研究?jī)?nèi)容與方法
    1.8 研究目的與意義
第二章 葡萄糖氧化酶基因的克隆與表達(dá)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 引物合成
        2.1.3 試劑盒、工具酶與生化試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基和溶液
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 產(chǎn)葡萄糖氧化酶菌株的篩選
        2.2.2 葡萄糖氧化酶基因的克隆
        2.2.3 葡萄糖氧化酶異源表達(dá)與性質(zhì)測(cè)定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 產(chǎn)葡萄糖氧化酶菌株的篩選結(jié)果
        2.3.2 葡萄糖氧化酶基因的克隆結(jié)果
        2.3.3 葡萄糖氧化酶異源表達(dá)與性質(zhì)測(cè)定結(jié)果
    2.4 討論
    本章小結(jié)
第三章 枝孢菌來源葡萄糖氧化酶的分子改良
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 菌株與質(zhì)粒
        3.1.2 引物合成
        3.1.3 試劑盒、工具酶與生化試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基、溶液及面包制作材料
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 序列及結(jié)構(gòu)分析
        3.2.2 突變體表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 畢赤酵母GS115 感受態(tài)的制備與電擊轉(zhuǎn)化
        3.2.4 葡萄糖氧化酶陽性轉(zhuǎn)化子的篩選
        3.2.5 葡萄糖氧化酶的搖瓶發(fā)酵和純化
        3.2.6 純化的葡萄糖氧化酶的性質(zhì)測(cè)定
        3.2.7 基于MD分析CnGOXA和CnGOXA-M1結(jié)構(gòu)
        3.2.8 面包制作流程
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 序列和結(jié)構(gòu)分析結(jié)果
        3.3.2 葡萄糖氧化酶陽性轉(zhuǎn)化子的篩選結(jié)果
        3.3.3 葡萄糖氧化酶的搖瓶發(fā)酵與純化結(jié)果
        3.3.4 葡萄糖氧化酶的部分酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定結(jié)果
        3.3.5 CnGOXA-M1對(duì)面包的影響
        3.3.6 CnGOXB突變體的部分酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定結(jié)果
    3.4 討論
    本章小結(jié)
第四章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]微生物葡萄糖氧化酶的研究進(jìn)展[J]. 廖兆民,蔡俊,林建國.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2018(07)
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[3]基因組的退化[J]. 唐元華.  高科技與產(chǎn)業(yè)化. 2017(05)
[4]葡萄糖氧化酶對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響[J]. 趙必遷,李學(xué)海.  廣東飼料. 2016(10)
[5]葡萄糖氧化酶對(duì)飼喂含霉變飼料小鼠體重和腸道微生物的影響[J]. 趙艷姣,崔亞利,陳寶江,孫海云,李三嚇,李同洲.  動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2014(11)
[6]葡萄糖氧化酶在仔豬上的應(yīng)用效果研究[J]. 湯海鷗,高秀華,姚斌,李學(xué)軍,王曉睿.  中國飼料. 2013(19)
[7]葡萄糖氧化酶對(duì)斷奶仔兔生產(chǎn)性能和免疫器官發(fā)育的影響[J]. 吳艷芳,呂景智,戴小丹,任紅立,王棟得,李自強(qiáng),張家驊,王永康.  中國飼料. 2012(14)
[8]葡萄糖氧化酶對(duì)仔豬胃腸道微生物區(qū)系及血液生化指標(biāo)的影響[J]. 楊久仙,張榮飛,張金柱,馬秋剛,白錦梅,喬立東.  畜牧與獸醫(yī). 2011(06)
[9]葡萄糖氧化酶制劑對(duì)肉雞腸道pH及盲腸微生物的影響[J]. 趙國先,宋海彬,馬可為,張振紅,計(jì)成,馬秋剛.  河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(04)

博士論文
[1]極端嗜酸真菌Bispora sp. MEY-1胞外糖苷水解酶類的產(chǎn)酶分析及其相關(guān)基因的克隆與表達(dá)[D]. 羅會(huì)穎.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008



本文編號(hào)：3733282