雞傳染性法氏囊�。↖nfectious bursal disease,IBD）是由雞傳染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的疾病。IBDV感染雞群后雞的法氏囊和B淋巴細(xì)胞是病毒攻擊的靶標(biāo)。VP2是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白和保護(hù)性抗原,是IBDV病毒檢測(cè)的重要指標(biāo),也是雞群免疫監(jiān)測(cè)的重要材料。本研究利用昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)IBDV DQ株VP2基因,利用獲得的VP2重組蛋白建立了IBDV抗體ELISA檢測(cè)方法。利用昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)IBDV DQ株VP2基因。首先,將信號(hào)肽基因GP67和VP2基因克隆至pFastbac1表達(dá)載體上,轉(zhuǎn)化至宿主菌E.coli JM109。經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、雙酶切和基因序列鑒定后,將陽(yáng)性克隆命名為pFastbac1-GP67-VP2。將pFastbac1-GP67--VP2轉(zhuǎn)化至宿主菌E.coli DH10Bac。經(jīng)位點(diǎn)特異性重組、三重抗性篩選和藍(lán)白斑篩選,獲得含有GP67蜂毒信號(hào)肽和IBDV VP2的重組桿粒。對(duì)重組桿粒進(jìn)行PCR鑒定,將鑒定為陽(yáng)性的桿粒命名為rBacmid-VP2。其次,采用陽(yáng)離子脂... 

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 IBD的流行病學(xué)與致病機(jī)理
        1.1.1 IBD的流行病學(xué)
        1.1.2 IBDV致病機(jī)理
    1.2 IBDV基因組組成
        1.2.1 VP1 蛋白
        1.2.2 VP2 蛋白
        1.2.3 VP3 蛋白
        1.2.4 VP4 蛋白
        1.2.5 VP5 蛋白
    1.3 IBDV VP2 基因在不同表達(dá)系統(tǒng)上的表達(dá)
        1.3.1 IBDV VP2 基因在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)上的表達(dá)
        1.3.2 IBDV VP2 基因在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)上的表達(dá)
        1.3.3 IBDV VP2 基因在原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)上的表達(dá)
    1.4 IBDV診斷技術(shù)進(jìn)展
        1.4.1 臨床診斷
        1.4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷
    1.5 選題目的及意義
第二章 IBDV VP2 基因在昆蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)與鑒定
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 菌種和質(zhì)粒
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 pFastbac1-GP67 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 pFastbac1-GP67-VP2 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 重組桿粒的構(gòu)建
        2.2.4 重組VP2 蛋白的制備與純化
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 pFastbac1-GP67 表達(dá)載體的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.2 pFastbac1-GP67-VP2 表達(dá)載體的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.3 rBacmid-VP2 的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.4 重組VP2 蛋白的制備與純化結(jié)果
    2.4 討論
        2.4.1 目的基因的優(yōu)化
        2.4.2 信號(hào)肽和表達(dá)載體的選擇
        2.4.3 蛋白表達(dá)和純化過(guò)程的優(yōu)化
    2.5 小結(jié)
第三章 IBDV抗體檢測(cè)方法的建立
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 抗原與血清
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 溶液配制
    3.2 方法
        3.2.1 IBDV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和陰性血清的制備
        3.2.2 IBDV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和陰性血清的鑒定
        3.2.3 IBDV抗體檢測(cè)方法的建立
        3.2.4 IBDV有效抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.2.5 母源抗體滴度的測(cè)定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 IBDV陽(yáng)性血清的鑒定
        3.3.2 陰性雞血清的鑒定
        3.3.3 IBDV抗體檢測(cè)方法的建立結(jié)果
        3.3.4 IBDV有效抗體效價(jià)的確定
        3.3.5 母源抗體滴度的測(cè)定結(jié)果
    3.4 討論
        3.4.1 有效抗體水平標(biāo)準(zhǔn)的選擇
        3.4.2 ELISA反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.4.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
        3.4.5 ELISA結(jié)果分析
    3.5 小結(jié)
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]同時(shí)檢測(cè)禽類(lèi)六種病毒的金標(biāo)銀染可視化基因芯片的構(gòu)建及初步應(yīng)用[J]. 向華,楊國(guó)淋,曹三杰,黃小波,伍銳,趙勤,文心田,文翼平.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(12)
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[4]人CD4胞外區(qū)蛋白在桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞系統(tǒng)中的表達(dá)純化及性質(zhì)鑒定[J]. 喬佳明,張芝晴,張振勇,李少偉,夏寧邵,顧穎.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2018(08)
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博士論文
[1]自組裝IBDV病毒樣顆粒的研制及應(yīng)用[D]. 王淼.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[2]VP1蛋白影響雞傳染性法氏囊病毒致病性的分子機(jī)制[D]. 高立.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014

碩士論文
[1]SUMO系統(tǒng)表達(dá)IBDV NB株VP2 S-P可溶性蛋白[D]. 邢瑞林.鄭州大學(xué) 2018
[2]IBDV主要結(jié)構(gòu)蛋白VP2、VP1原核表達(dá)及其ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研發(fā)[D]. 劉婷.廣西大學(xué) 2016
[3]IBDV雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立和膠體金試紙條的研制[D]. 劉靜靜.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3732988