雞傳染性法氏囊�。↖nfectious bursal disease,IBD）是由雞傳染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的疾病。IBDV感染雞群后雞的法氏囊和B淋巴細胞是病毒攻擊的靶標。VP2是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白和保護性抗原,是IBDV病毒檢測的重要指標,也是雞群免疫監(jiān)測的重要材料。本研究利用昆蟲表達系統(tǒng)成功表達IBDV DQ株VP2基因,利用獲得的VP2重組蛋白建立了IBDV抗體ELISA檢測方法。利用昆蟲表達系統(tǒng)表達IBDV DQ株VP2基因。首先,將信號肽基因GP67和VP2基因克隆至pFastbac1表達載體上,轉(zhuǎn)化至宿主菌E.coli JM109。經(jīng)聚合酶鏈式反應(yīng)、雙酶切和基因序列鑒定后,將陽性克隆命名為pFastbac1-GP67-VP2。將pFastbac1-GP67--VP2轉(zhuǎn)化至宿主菌E.coli DH10Bac。經(jīng)位點特異性重組、三重抗性篩選和藍白斑篩選,獲得含有GP67蜂毒信號肽和IBDV VP2的重組桿粒。對重組桿粒進行PCR鑒定,將鑒定為陽性的桿粒命名為rBacmid-VP2。其次,采用陽離子脂... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 IBD的流行病學(xué)與致病機理
        1.1.1 IBD的流行病學(xué)
        1.1.2 IBDV致病機理
    1.2 IBDV基因組組成
        1.2.1 VP1 蛋白
        1.2.2 VP2 蛋白
        1.2.3 VP3 蛋白
        1.2.4 VP4 蛋白
        1.2.5 VP5 蛋白
    1.3 IBDV VP2 基因在不同表達系統(tǒng)上的表達
        1.3.1 IBDV VP2 基因在桿狀病毒表達系統(tǒng)上的表達
        1.3.2 IBDV VP2 基因在畢赤酵母表達系統(tǒng)上的表達
        1.3.3 IBDV VP2 基因在原核表達系統(tǒng)表達上的表達
    1.4 IBDV診斷技術(shù)進展
        1.4.1 臨床診斷
        1.4.2 實驗室診斷
    1.5 選題目的及意義
第二章 IBDV VP2 基因在昆蟲細胞內(nèi)的表達與鑒定
    2.1 試驗材料
        2.1.1 菌種和質(zhì)粒
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 pFastbac1-GP67 表達載體的構(gòu)建
        2.2.2 pFastbac1-GP67-VP2 表達載體的構(gòu)建
        2.2.3 重組桿粒的構(gòu)建
        2.2.4 重組VP2 蛋白的制備與純化
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 pFastbac1-GP67 表達載體的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.2 pFastbac1-GP67-VP2 表達載體的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.3 rBacmid-VP2 的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.4 重組VP2 蛋白的制備與純化結(jié)果
    2.4 討論
        2.4.1 目的基因的優(yōu)化
        2.4.2 信號肽和表達載體的選擇
        2.4.3 蛋白表達和純化過程的優(yōu)化
    2.5 小結(jié)
第三章 IBDV抗體檢測方法的建立
    3.1 試驗材料
        3.1.1 抗原與血清
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 溶液配制
    3.2 方法
        3.2.1 IBDV標準陽性血清和陰性血清的制備
        3.2.2 IBDV標準陽性血清和陰性血清的鑒定
        3.2.3 IBDV抗體檢測方法的建立
        3.2.4 IBDV有效抗體效價的測定
        3.2.5 母源抗體滴度的測定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 IBDV陽性血清的鑒定
        3.3.2 陰性雞血清的鑒定
        3.3.3 IBDV抗體檢測方法的建立結(jié)果
        3.3.4 IBDV有效抗體效價的確定
        3.3.5 母源抗體滴度的測定結(jié)果
    3.4 討論
        3.4.1 有效抗體水平標準的選擇
        3.4.2 ELISA反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.4.3 實驗動物的選擇
        3.4.5 ELISA結(jié)果分析
    3.5 小結(jié)
第四章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]IBDV主要結(jié)構(gòu)蛋白VP2、VP1原核表達及其ELISA抗體檢測試劑盒的研發(fā)[D]. 劉婷.廣西大學(xué) 2016
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本文編號：3732988