托品烷生物堿(Tropane alkaloids,TAs)是在臨床上常用的一類(lèi)抗膽堿藥物,在鎮(zhèn)痛、麻醉、抗暈動(dòng)病、戒毒、帕金森氏病、農(nóng)藥中毒等治療方面有良好的作用。目前托品烷生物堿主要從天然植物顛茄(Atropa belladonna)、曼陀羅(Datura stramonium)、山莨菪(Anisodus tanguticus)等植物中提取,市場(chǎng)需求巨大,工業(yè)合成的成本較高。顛茄是被中國(guó)藥典收錄,主要提供托品烷生物堿的商業(yè)藥源植物,天然的顛茄中托品烷類(lèi)生物堿的含量很低,利用基因代謝工程來(lái)提高顛茄中的托品烷生物堿的含量具有很好的研究意義。本研究通過(guò)顛茄基因組DNA克隆得到藥用植物顛茄下游關(guān)鍵酶基因啟動(dòng)子H6H-p;從C58C1發(fā)根農(nóng)桿菌pRiA4質(zhì)粒上克隆得到rolC基因。將rolC基因克隆構(gòu)建至pBI121的GUS編碼區(qū)獲得CaMV35S驅(qū)動(dòng)的表達(dá)載體;同樣地,以pBI121為表達(dá)載體,H6H-p為組織定位啟動(dòng)子與rolC基因進(jìn)行載體構(gòu)建,獲得H6H-p驅(qū)動(dòng)的rolC基因定位表達(dá)載體;進(jìn)行轉(zhuǎn)化獲取得到EHA105-pBI121-CaMV35S-rolC和EHA105-pBI121-H6...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1莨菪堿分子結(jié)構(gòu)

莨菪堿,亦稱(chēng)為天仙子堿,它首先是從傳統(tǒng)中草藥天仙子、洋金花中分離而得到的顛茄生物堿之一,其分子結(jié)構(gòu)是由莨菪醇和莨菪酸縮合而生成的酯(如圖1-1)。呈現(xiàn)出白色結(jié)晶性粉末,無(wú)臭,有苦辣味。易產(chǎn)生消旋,水溶液呈堿性,在乙醇和稀酸中極易溶解,在氯仿、水、乙醚和苯中可溶。莨菪堿主要存在于茄....

圖1-2山莨菪堿分子結(jié)構(gòu)

山莨菪堿(Anisodamine),是我國(guó)學(xué)者從茄科植物唐古特山莨菪(Anisodustanguticus(Maxim.)Pascher)的根中提取出來(lái)的一種莨菪烷類(lèi)生物堿(覃綱等,2010);外形為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末,無(wú)臭,極易溶于水,在乙醇中易溶。分子式為C17H23NO....

圖1-3托品烷類(lèi)生物堿合成途徑(強(qiáng)瑋等,2016)

1.1.4托品烷生物堿合成途徑研究進(jìn)展托品烷生物堿在茄科植物中的合成途經(jīng)已經(jīng)明確(如圖1-3),主要起始于鳥(niǎo)氨酸和精氨酸的脫羧,然后由合成途徑上游的第一個(gè)關(guān)鍵酶N-甲基腐胺轉(zhuǎn)移酶(PMT)(SuzukiKetal,1999),催化生成托品烷生物堿的合成前體物質(zhì)N-甲基腐胺....

圖3-1H6H-p啟動(dòng)子序列全長(zhǎng)

通過(guò)VectorNITexplorer軟件分析,獲取H6H-p啟動(dòng)子序列全長(zhǎng),如圖3-1,H6H-p全長(zhǎng)為1100bp,起始密碼子是ATG。3.1.2rolC基因生物信息學(xué)分析

本文編號(hào)：4005463