目的:探討微小RNA-181a-5p（miR-181a-5p）靶向富含亮氨酸的重復(fù)失速相互作用蛋白1(LRRFIP1基因介導(dǎo)高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞凋亡及炎癥反應(yīng)的分子機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)小鼠腎小球系膜細(xì)胞SV40MES13,30 mmol/L高糖處理腎小球系膜細(xì)胞建立細(xì)胞損傷模型。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）與蛋白免疫印跡法（Western blot）分別檢測(cè)miR-181a-5p、LRRFIP1的表達(dá)量。分別將miR-181a-5p mimics、miR-NC、si-LRRFIP1、siNC、pcDNA-LRRFIP1與miR-181a-5p mimics、pcDNA-NC與miR-181a-5p mimics轉(zhuǎn)染至腎小球系膜細(xì)胞,使用含有30 mmol/L高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-181a-5p過表達(dá)對(duì)野生型和突變型LRRFIP1熒光素酶活性的影響; Western blot檢測(cè)活化的含半胱... 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料與試劑
    2 方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞中miR-181a-5p、LRRFIP1 mRNA的表達(dá)水平
        2.3 ELISA法檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β水平
        2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率
        2.5 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)miR-181a-5p的靶基因
        2.6 Western
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
    1 HG對(duì)腎小球系膜細(xì)胞miR-181a-5p和LRRFIP1表達(dá)的影響與NC組相比，HG組腎小球系膜細(xì)胞中miR-181a-5p的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05),LRRFIP1 mRNA及蛋白水平顯著升高(P<0.05)。見圖1，表2。
    2過表達(dá)miR-181a-5p對(duì)HG介導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞SV40 MES 13凋亡和炎癥因子釋放的影響
    3 低表達(dá)LRRFIP1對(duì)HG介導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞凋亡和炎癥因子釋放的影響
    4 miR-181a-5p靶向LRRFIP1
    5 高表達(dá)LRRFIP1可以逆轉(zhuǎn)對(duì)HG介導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞凋亡和炎癥因子釋放的影響
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]敲低高遷移率族蛋白B1（HMGB1）抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡[J]. 李佳,莊乙君,李軍,陳文.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019(06)
[2]糖腎清2號(hào)提取物調(diào)控AMPK信號(hào)通路對(duì)高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響[J]. 張笑栩,何毓璽,王潔,王達(dá)利,楊蕾,張正菊,相瑞陽,張承承,白華,孟鳳仙.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2019(04)
[3]敲低微小RNA-377表達(dá)可抑制高糖誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞增殖及炎性反應(yīng)[J]. 楊光,黎小燕,吳乙偲,鐘樹妹.  中華腎臟病雜志. 2018 (06)



本文編號(hào)：3730683