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利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)編輯擬南芥ILR3基因及功能驗(yàn)證

發(fā)布時(shí)間:2022-12-06 21:17
  擬南芥轉(zhuǎn)錄因子ILR3(IAA-Leucine Resistant 3)在鐵穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)、葡萄糖異硫氰酸鹽(glucosinolate,簡(jiǎn)稱GLS)的生物合成和病原體響應(yīng)方面起到重要作用。為更深入探索該轉(zhuǎn)錄因子在植物體內(nèi)的更多功能,利用YAO基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)Cas9在擬南芥中表達(dá),成功獲得ILR3基因編輯突變體。測(cè)序結(jié)果及序列分析結(jié)果表明,在ILR3編輯擬南芥中,該基因編碼區(qū)發(fā)生了堿基缺失或插入,導(dǎo)致蛋白ILR3保守結(jié)構(gòu)域丟失。并且,這些基因編輯突變體T2代幼苗與T-DNA插入突變體ilr3-2在缺鐵環(huán)境下表現(xiàn)出相同的性狀,進(jìn)一步驗(yàn)證ILR3轉(zhuǎn)錄因子在植物對(duì)鐵的吸收及體內(nèi)平衡的作用,也為深入研究其更多生物學(xué)功能奠定了工作基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】:5 頁

【文章目錄】:
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 擬南芥AtILR3編輯靶位點(diǎn)的確定
    1.3 gRNA的合成及與載體的連接
    1.4 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化及基因編輯植株的獲得
    1.5 AtILR3編輯擬南芥的表型分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 AtILR3編輯靶位點(diǎn)的篩選及載體構(gòu)建
    2.2 擬南芥基因編輯植株的獲得及鑒定
    2.3 AtILR3編輯擬南芥的表型
3 討論



本文編號(hào):3711647

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